SCM016
Medio de congelación de células madre mesenquimatosas (1x)
The Mesenchymal Stem Cell Freezing Medium (1x) has been optimized & validated for Stem cell culture. This medium is available in a 50ml format.
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About This Item
UNSPSC Code:
12352207
eCl@ss:
32160801
NACRES:
NA.75
Productos recomendados
Quality Level
form
liquid
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
cell culture | stem cell: suitable
input
sample type mesenchymal stem cell(s)
shipped in
dry ice
Application
1. Descongele por completo el medio de congelación de cultivo celular y mezcle bien girando suavemente la botella. Mantenga el medio de congelación sobre hielo durante su uso.
2. Las células que se van a congelar deben estar en fase de crecimiento logarítmico tardío.
3. Deben disociarse las monocapas. Después de la disociación, las células se resuspenden en medio de expansión de células madre mesenquimatosas (Nº de ref.SCM015 ) y se cuentan para determinar su viabilidad y su número.
4. Centrifugue las células a 300 x g durante 3 min. Retire el medio de encima del sedimento.
5. Resuspenda las células en el medio de congelación de células madre mesenquimatosas a una concentración de ~4 x 106 células/ml. Congele 1 ml de células/vial. Una vez que las células se hayan resuspendido y distribuido en alícuotas en viales de crioconservación adecuados, pueden colocarse en un recipiente de congelación y el procedimiento de congelación normal debe iniciarse en un plazo de cinco minutos.
6. Las células deben conservarse a una temperatura igual o inferior a -80°C. Para el almacenamiento prolongado, las células deben almacenarse en un ultracongelador (-150°C) o en nitrógeno líquido (-196°C).
7. Las células crioconservadas deben descongelarse como sigue:
a. No descongele las células hasta que tenga a mano el medio recomendado y el material de plástico y/o vidrio adecuado.
b. Descongele las células rápidamente en un baño María a 37°C. Importante: no agite las células en Vórtex.
c. Esterilice el vial enjuagándolo con etanol al 70 %.
d. En una campana de flujo laminar, use una pipeta de 1 o 2 ml para transferir las células a un tubo cónico estéril de 15 ml. Tenga cuidado de no introducir burbujas durante el proceso de transferencia.
e. Con una pipeta de 10 ml, añada lentamente gota a gota 9 ml de medio de expansión de células madre mesenquimatosas (precalentado a 37°C) al tubo cónico de 15 ml. IMPORTANTE: no añada todo el volumen de medio a la vez a las células. Esto puede producir una disminución de la viabilidad celular debido a un choque osmótico.
f. Mezcle con suavidad la suspensión celular pipeteando dos veces hacia arriba y hacia abajo lentamente. Tenga cuidado de no introducir burbujas. IMPORTANTE: no agite las células en Vórtex.
g. Centrifugue el tubo a 300 x g durante 2-3 minutos para sedimentar las células.
h. Decante la mayor cantidad posible del sobrenadante
i. Resuspenda las células en un volumen total de 10 ml de medio de expansión de células madre mesenquimatosas (precalentado a 37°C).
j. Coloque la mezcla de células en una placa de cultivo de tejidos de 10 cm.
k. Incube las células a 37°C en un incubador humidificado con CO2 al 5 %.
l. Al día siguiente, cambie el medio por medio de expansión de células madre mesenquimatosas reciente (precalentado a 37°C). Cambie por medio reciente cada dos o tres días a partir de entonces.
m. Cuando las células tengan una confluencia de aproximadamente el 80 %, pueden disociarse con Accutase® (Nº de ref. SCR005) y subcultivarse o congelarse para su uso posterior.
2. Las células que se van a congelar deben estar en fase de crecimiento logarítmico tardío.
3. Deben disociarse las monocapas. Después de la disociación, las células se resuspenden en medio de expansión de células madre mesenquimatosas (Nº de ref.SCM015 ) y se cuentan para determinar su viabilidad y su número.
4. Centrifugue las células a 300 x g durante 3 min. Retire el medio de encima del sedimento.
5. Resuspenda las células en el medio de congelación de células madre mesenquimatosas a una concentración de ~4 x 106 células/ml. Congele 1 ml de células/vial. Una vez que las células se hayan resuspendido y distribuido en alícuotas en viales de crioconservación adecuados, pueden colocarse en un recipiente de congelación y el procedimiento de congelación normal debe iniciarse en un plazo de cinco minutos.
6. Las células deben conservarse a una temperatura igual o inferior a -80°C. Para el almacenamiento prolongado, las células deben almacenarse en un ultracongelador (-150°C) o en nitrógeno líquido (-196°C).
7. Las células crioconservadas deben descongelarse como sigue:
a. No descongele las células hasta que tenga a mano el medio recomendado y el material de plástico y/o vidrio adecuado.
b. Descongele las células rápidamente en un baño María a 37°C. Importante: no agite las células en Vórtex.
c. Esterilice el vial enjuagándolo con etanol al 70 %.
d. En una campana de flujo laminar, use una pipeta de 1 o 2 ml para transferir las células a un tubo cónico estéril de 15 ml. Tenga cuidado de no introducir burbujas durante el proceso de transferencia.
e. Con una pipeta de 10 ml, añada lentamente gota a gota 9 ml de medio de expansión de células madre mesenquimatosas (precalentado a 37°C) al tubo cónico de 15 ml. IMPORTANTE: no añada todo el volumen de medio a la vez a las células. Esto puede producir una disminución de la viabilidad celular debido a un choque osmótico.
f. Mezcle con suavidad la suspensión celular pipeteando dos veces hacia arriba y hacia abajo lentamente. Tenga cuidado de no introducir burbujas. IMPORTANTE: no agite las células en Vórtex.
g. Centrifugue el tubo a 300 x g durante 2-3 minutos para sedimentar las células.
h. Decante la mayor cantidad posible del sobrenadante
i. Resuspenda las células en un volumen total de 10 ml de medio de expansión de células madre mesenquimatosas (precalentado a 37°C).
j. Coloque la mezcla de células en una placa de cultivo de tejidos de 10 cm.
k. Incube las células a 37°C en un incubador humidificado con CO2 al 5 %.
l. Al día siguiente, cambie el medio por medio de expansión de células madre mesenquimatosas reciente (precalentado a 37°C). Cambie por medio reciente cada dos o tres días a partir de entonces.
m. Cuando las células tengan una confluencia de aproximadamente el 80 %, pueden disociarse con Accutase® (Nº de ref. SCR005) y subcultivarse o congelarse para su uso posterior.
Physical form
Formulación que contiene suero. Contiene DMSO al 10 %.
Storage and Stability
Conservar a -20°C.
Legal Information
Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.
Storage Class
10 - Combustible liquids
wgk_germany
WGK 1
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
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