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Roche
Master mix Fast Start SYBR Green
sufficient for 500 reactions, sufficient for 5000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR
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About This Item
Codice UNSPSC:
41106300
NACRES:
NA.55
Prodotti consigliati
impiego
sufficient for 500 reactions
sufficient for 5000 reactions
Livello qualitativo
Caratteristiche
dNTPs included: no
hotstart
Produttore/marchio commerciale
Roche
Confezionamento
pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001)
pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)
tecniche
RT-qPCR: suitable
qPCR: suitable
input
purified DNA
Metodo di rivelazione
probe-based
Categorie correlate
Descrizione generale
Master mix Fast Start SYBR Green; istruzioni per l′uso
La master mix FastStart™ SYBR® Green è una mix pronta all′uso e senza ROX per reazioni hot start per PCR quantitativa (qPCR) e trascrizione inversa (RT)-qPCR adatta a tutti i sistemi per real time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler®. Questa master mix semplifica la preparazione delle reazioni per il rilevamento e l'analisi del DNA. In combinazione con la macchina per real-time PCR, con i primer appropriati e con una sonda a idrolisi, la master mix FastStart™ TaqMan® Probe consente un rilevamento e una quantificazione molto sensibili di specifiche sequenze di DNA.
Il SYBR® Green I è un colorante specifico per il DNA a doppia elica. Incluso nella miscela di reazione, si lega ai prodotti di PCR amplificati ad ogni fase di sintesi. L'amplicone viene quindi rilevato grazie alla sua fluorescenza.
È stato dimostrato che i protocolli che fanno uso di hot start migliorano in modo significativo la specificità, la sensibilità e la resa della PCR. I gruppi bloccanti termolabili posti su alcuni dei residui amminoacidici della DNA polimerasi Taq FastStart™ rendono l'enzima modificato inattivo a temperatura ambiente. Questo fa sì che non si verifichi alcun allungamento durante la fase in cui i primer possono legarsi in modo non specifico. La taq DNA polimerasi FastStart™ viene attivata rimuovendo i gruppi bloccanti mediante alta temperatura (cioè durante la fase di pre-incubazione a + 95°C).
La master mix FastStart™ SYBR® Green può essere utilizzata per l′amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, è necessario adattare il protocollo di rilevamento alle condizioni di reazione del proprio strumento di real-time PCR e progettare i primer specifici per ciascun target.
E′ possibile combinare questa master mix con il kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per ottenere risultati eccellenti nella qRT-PCR in due fasi.
La master mix FastStart™ SYBR® Green è una mix pronta all′uso e senza ROX per reazioni hot start per PCR quantitativa (qPCR) e trascrizione inversa (RT)-qPCR adatta a tutti i sistemi per real time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler®. Questa master mix semplifica la preparazione delle reazioni per il rilevamento e l'analisi del DNA. In combinazione con la macchina per real-time PCR, con i primer appropriati e con una sonda a idrolisi, la master mix FastStart™ TaqMan® Probe consente un rilevamento e una quantificazione molto sensibili di specifiche sequenze di DNA.
Il SYBR® Green I è un colorante specifico per il DNA a doppia elica. Incluso nella miscela di reazione, si lega ai prodotti di PCR amplificati ad ogni fase di sintesi. L'amplicone viene quindi rilevato grazie alla sua fluorescenza.
È stato dimostrato che i protocolli che fanno uso di hot start migliorano in modo significativo la specificità, la sensibilità e la resa della PCR. I gruppi bloccanti termolabili posti su alcuni dei residui amminoacidici della DNA polimerasi Taq FastStart™ rendono l'enzima modificato inattivo a temperatura ambiente. Questo fa sì che non si verifichi alcun allungamento durante la fase in cui i primer possono legarsi in modo non specifico. La taq DNA polimerasi FastStart™ viene attivata rimuovendo i gruppi bloccanti mediante alta temperatura (cioè durante la fase di pre-incubazione a + 95°C).
La master mix FastStart™ SYBR® Green può essere utilizzata per l′amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, è necessario adattare il protocollo di rilevamento alle condizioni di reazione del proprio strumento di real-time PCR e progettare i primer specifici per ciascun target.
E′ possibile combinare questa master mix con il kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per ottenere risultati eccellenti nella qRT-PCR in due fasi.
Applicazioni
La master mix FastStart™ SYBR® Green Master che utilizza SYBR® Green I come metodo di rilevazione è usata in qPCR e nella qRT-PCR a due fasi. È anche usata:
La master mix FastStart™ SYBR® Green può essere utilizzata con qualsiasi strumento per real-time qPCR ad eccezione degli strumenti LightCycler®.
- nella reazione a catena della polimerasi (PCR) quantitativa per quantificare il titolo dei virus adeno-associati (AAV)
- in qPCR per determinare i livelli di espressione dei geni Col6a1-3 relativamente alla gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi (GAPDH)
- nella reazione a catena della polimerasi quantitativa real-time (qRT-PCR) dell′mRNA del recettore-1 per gli estrogeni accoppiato a proteine G (GPER)
- in qRT-PCR per studi di espressione genica
La master mix FastStart™ SYBR® Green può essere utilizzata con qualsiasi strumento per real-time qPCR ad eccezione degli strumenti LightCycler®.
Caratteristiche e vantaggi
- Migliora la sensibilità e la specificità della PCR:
- Evita la sovrastima dei risultati della qPCR:
- Amplifica e rivela un′ampia gamma di bersagli DNA e cDNA:
- Utilizzare la master mix con qualsiasi strumento per real-time PCR ad eccezione degli strumenti LightCycler® :
- Risparmia tempo e fatica nella messa a punto della qPCR:
- Previeni i falsi positivi risultanti da contaminazione da carry over:
Componenti
La Master mix FastStart SYBR Green, con concentrazione 2x, contiene: Taq DNA polimerasi FastStart, tampone di reazione, nucleotidi (dATP, dCTP, dGTP, dUTP) e il colorante SYBR Green I.
Qualità
Test funzionale: ogni lotto è testato per le prestazioni in qPCR utilizzando tre tipi di templato: un templato ricco di GC, un templato ricco di AT e un templato lungo (circa 440 bp).
Altre note
Target per qPCR
In linea di principio, la master mix FastStart SYBR Green può essere utilizzata per l'amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, per ogni target, è necessario:
Per raccomandazioni generali fare riferimento al manuale per l′operatore del proprio strumento per real-time PCR.
Due versioni di mix disponibili
La master mix è disponibile in due forme: - una contenente il colorante di riferimento ROX e una senza ROX.
Prevenzione della contaminazione da carryover
Questa master mix contiene dUTP, che sarà incorporato nei prodotti PCR per aiutare a prevenire i falsi positivi derivanti dalla contaminazione da carryover. Nelle PCR successive, è possibile aggiungere l′Uracil-DNA Glicosilasi che degraderà gli eventuali contaminanti da carryover contenenti uracile (cioè i prodotti delle amplificazioni da PCR precedenti).
qRT-PCR
Combina questa master mix con il nostro Kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per effettuare una qRT-PCR a due step. Questo kit fornisce risultati eccellenti e funziona in modo efficiente con tutti gli strumenti per real-time PCR
In linea di principio, la master mix FastStart SYBR Green può essere utilizzata per l'amplificazione e il rilevamento di qualsiasi target di DNA o cDNA, compresi quelli ricchi di GC o AT. Tuttavia, per ogni target, è necessario:
- adattare il protocollo di rilevamento alle condizioni di reazione adatte al proprio strumento per real-time PCR e
- disegnare i primer da PCR specifici per quel determinato target.
Per raccomandazioni generali fare riferimento al manuale per l′operatore del proprio strumento per real-time PCR.
Due versioni di mix disponibili
La master mix è disponibile in due forme: - una contenente il colorante di riferimento ROX e una senza ROX.
Prevenzione della contaminazione da carryover
Questa master mix contiene dUTP, che sarà incorporato nei prodotti PCR per aiutare a prevenire i falsi positivi derivanti dalla contaminazione da carryover. Nelle PCR successive, è possibile aggiungere l′Uracil-DNA Glicosilasi che degraderà gli eventuali contaminanti da carryover contenenti uracile (cioè i prodotti delle amplificazioni da PCR precedenti).
qRT-PCR
Combina questa master mix con il nostro Kit Transcriptor First Strand cDNA Synthesis per effettuare una qRT-PCR a due step. Questo kit fornisce risultati eccellenti e funziona in modo efficiente con tutti gli strumenti per real-time PCR
Da utilizzare solo per ricerca nel settore life science. Non usare a scopo diagnostico.
Note legali
FastStart is a trademark of Roche
LightCycler is a registered trademark of Roche
SYBR is a registered trademark of Life Technologies
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.
Codice della classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 1
Punto d’infiammabilità (°F)
does not flash
Punto d’infiammabilità (°C)
does not flash
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