BGALA-RO

ββ-Glucuronidasi/arilsolfatasi

from Helix pomatia

• Sinonimo/i: arilsolfatasi/β-glucuronidasi, solfatasi/β-glucuronidasi
• Codice UNSPSC: 12352204

Proprietà

• Origine biologica: animal (Helix pomatia)
• Livello qualitativo: 100
• Forma fisica: solution
• Attività specifica: 10.8 U/mL, 25 °C (ß-Glucuronidase); 25 U/mL, 25 °C (with 4-NP-sulfate, Arylsulfatase)
• Confezionamento: pkg of 10 mL (10127698001); pkg of 2 mL (10127060001)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• tecniche: ELISA: suitable
• Colore: colorless to brown
• pH ottimale: 4.5-5.0
• Solubilità: water: miscible
• applicazioni: life science and biopharma; sample preparation
• Temperatura di conservazione: 2-8°C

Descrizione

Descrizione generale

βLa β-glucuronidasi/arilsolfatasi da Helix pomatiais è la preparazione enzimatica con attività solfatasica più utilizzata e possiede una specificità molto ampia. È una miscela grezza di enzimi e la sua preparazione non comporta alcun tipo di separazione cromatografica. Questa preparazione possiede attività glucuronidasica e solfatasica. L'idrolisi enzimatica prima del rilevamento è essenziale per raggiungere un'elevata sensibilità durante l'analisi. Dopo l′idrolisi il campione può essere analizzato mediante spettroscopia di massa, gascromatografia, HPLC o saggi immunologici. Per l′analisi antidoping l′attività solfatasica è essenziale, insieme all′attività glucuronidasica, per il rilevamento di tutti i coniugati delle sostanze psicoattive presenti nel campione. La β-glucuronidasi/arilsolfatasi è utilizzata anche per l'idrolisi enzimatica dei glucuronidi e degli esteri del solfato nei fluidi biologici e principalmente nelle urine.

Specificità

β-La glucuronidasi/arilsolfatasi mostra un′ampia specificità nei confronti di molti tipi di β-glucuronidi ed esteri del solfato.

Specificità della β-glucuronidasi:
I glicosidi che l′acido β-D-glucuronico forma con una serie di composti contenenti gruppi idrossilici idrolizzano rapidamente in presenza di β-glucuronidasi.

• Tali composti includono steroidi, come estriolo (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), androsterone, pregnanediolo, tetraidrocortisone,
• fenoli, come fenolftaleina (K_m = 0,39 mM), 4-nitro-fenol, 4-metilumbelliferone,
• farmaci come cloramfenicolo e tetraidrocannabinoli,
• e metaboliti come tiroxina e bilirubina.

Sono idrolizzati anche i polisaccaridi che contengono residui dell′acido β-glucuronico, come l′acido ialuronico.
βLa β-glucuronidasi possiede un′elevata specificità sul versante dei carboidrati: non vengono idrolizzati né i α-glucosidi né gli acidi β-glucosiduronici. Tuttavia, la natura del residuo collegato al residuo dell′acido β-glucuronico non ha quasi nessuna importanza.

Attività specifica: 5,5 U/mL a +38 °C con fenolftaleina-β-glucuronide come substrato (4,5 U/mL a +25 °C con 4-nitro-fenil-β-D-glucuronide come substrato = 100.000 unità Fishman/mL a +38 °C con fenolftaleina-β-glucuronide come substrato). 1 unità Fishman rilascia 1 μg di fenolftaleina da fenolftaleina-β-glucuronide in 1 ora a +38 °C.

Specificità dell′arilsolfatasi:
Gli esteri del solfato di molti fenoli sono idrolizzati in presenza di arilsolfatasi. Per esempio, gli steroidi solfati come estronesolfato, 4-nitrofenil idrogeno solfato (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), 4-nitro-pirocatecolo 2-solfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) e fenolftaleina disolfato.

Attività specifica: 2,6 U/mL a +38 °C con fenolftaleina disolfato come substrato (14 U/mL a +25 °C con 4-nitrofenil solfato come substrato = 800.000 unità Roy/mL a +38 °C con 2-idrossi-5-nitrofenil solfato come substrato). 1 unità Roy rilascia 1 μg di 2-idrossi-5-nitrofenil solfato in 1 ora a +38 °C.

Specificità della β-glucuronidasi:
I glicosidi che l′acido β-D-glucuronico forma con una serie di composti contenenti gruppi idrossilici idrolizzano rapidamente in presenza di β-glucuronidasi.

• Tali composti includono steroidi, come estriolo (K_m = 0,42 mM, pH 4,5), androsterone, pregnanediolo, tetraidrocortisone,
• fenoli, come fenolftaleina (K_m = 0,39 mM), 4-nitro-fenol, 4-metilumbelliferone,
• farmaci come cloramfenicolo e tetraidrocannabinoli,
• e metaboliti come tiroxina e bilirubina.

Sono idrolizzati anche i polisaccaridi che contengono residui dell′acido β-glucuronico, come l′acido ialuronico.
βLa β-glucuronidasi possiede un′elevata specificità sul versante dei carboidrati: non vengono idrolizzati né i α-glucosidi né gli acidi β-glucosiduronici. Tuttavia, la natura del residuo collegato al residuo dell′acido β-glucuronico non ha quasi nessuna importanza.

Specificità dell′arilsolfatasi:
Gli esteri del solfato di molti fenoli sono idrolizzati in presenza di arilsolfatasi. Per esempio, gli steroidi solfati come estronesolfato, 4-nitrofenil idrogeno solfato (K_m = 1,8 mM, pH 7,3), 4-nitro-pirocatecolo 2-solfato (K_m = 1,25 mM, pH 7,5) e fenolftaleina disolfato.

Applicazioni

βLa β-glucuronidasi/arilsolfatasi è stata ampiamente utilizzata nella ricerca e nei laboratori analitici per l'idrolisi enzimatica simultanea degli steroidi β-glucuronidi e degli esteri del solfato. L'enzima viene utilizzato durante la preparazione del campione per scindere i glucuronidi e gli esteri del solfato prima dell′analisi mediante GC-MS e HPLC, dei saggi immunologici o di altri metodi analitici, inclusa l′analisi antidoping e l′idrolisi degli steroidi coniugati (glucuronidi) e degli esteri del solfato nelle urine e in altri fluidi corporei.

Caratteristiche e vantaggi

• Effettua la deconiugazione e il rilevamento dei glucuronidi e degli esteri del solfato.
• Effettua un rapido screening di steroidi, benzodiazepine, cannabinoidi, oppioidi e altri farmaci.

Componenti

EC 3.1.6.1 & 3.2.1.31

Principio

La glucuronidazione è uno dei principi di base del metabolismo. La maggior parte delle sostanze con cui il corpo umano viene a contatto subisce un processo metabolico che include la coniugazione con acido glucuronico da parte delle UDP-glucuronosiltransferasi (UGT). Questo enzima catalizza il trasferimento di un gruppo glucuronilico a diverse molecole biologiche e farmacologicamente attive, sia endogene che esogene. Il glucuronide è in generale più solubile e meno tossico, oltre che più facilmente escreto dal corpo umano rispetto alla molecola originale.
Inoltre, può avere luogo la solfatazione del farmaco o della sostanza chimica per mezzo delle solfotransferasi presenti nel corpo umano. La solfatazione è, in generale, meno prevedibile della glucuronidazione dal momento che esistono molti isoenzimi delle solfotransferasi e vi sono differenze individuali nel rapporto tra glucuronidazione e solfatazione della sostanza.

Definizione di unità

Glucuronidasi:
Unità standard
L'unità standard dell'attività della β-glucuronidasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μM il tasso di rilascio del 4-nitrofenolo dall′acido 4-nitrofenil β-D-glucosiduronico, a una temperatura di +25 °C e a pH 4,5.
Unità di fenolftaleina
L'unità di fenolftaleina dell'attività della β-glucuronidasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μM il tasso di rilascio della fenolftaleina dall′acido fenoftaleina β-D-glucosiduronico, a una temperatura di +38 °C.
Circa 4,5 unità standard equivalgono a 5,5 unità di fenolftaleina.
Unità Fishman
L'unità Fishman dell'attività della β-glucuronidasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μg il tasso di rilascio della fenolftaleina dall′acido fenolftaleina β-D-glucosiduronico, a una temperatura di +38 °C.
Una unità standard equivale all′incirca a 22.000 unità Fishman (1 unità di fenolftaleina equivale a 19.000 unità Fishman).
Arilsolfatasi:
Unità standard
L'unità standard dell'attività dell′arilsolfatasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μM il tasso di rilascio del 4-nitrofenolo dal 4-nitrofenil solfato, a una temperatura di +25 °C e a pH 6,2.
Unità di fenolftaleina
L'unità di fenolftaleina dell'attività dell′arilsolfatasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μM il tasso di rilascio della fenolftaleina dalla fenolftaleina disolfato, a una temperatura di +38 °C e a pH 6,2.
Circa 5,4 unità standard equivalgono a 1 unità di fenolftaleina.
Unità Roy
L'unità Roy dell'attività dell′arilsolfatasi è rappresentata dall'attività enzimatica che aumenta di 1 μg il tasso di rilascio del 4-nitropirocatecolo dal 2-idrossi-5-nitrofenil idrogeno solfato (4-nitropirocatecolo 2-solfato), a una temperatura di +38 °C e a pH 6,2.
Una unità standard equivale all′incirca a 57.000 unità Roy (1 unità di fenolftaleina equivale a 308.000 unità Roy).

Stato fisico

Soluzione in soluzione salina, stabilizzata

Nota sulla preparazione

Concentrazione di lavoro: In molte applicazioni il prodotto può essere diluito con acqua subito prima dell′uso, oppure impiegato non diluito.
Nota: La presente preparazione di β-glucuronidasi/arilsolfatasi è molto concentrata e per alcune applicazioni deve essere diluita. Inoltre, nella preparazione dei protoplasti si deve individuare empiricamente la concentrazione precisa da usare per un determinato ceppo di lievito.
Condizioni di conservazione (soluzione di lavoro): Nota: Porzioni frazionate della preparazione diluita possono essere conservate tra -15 e -25 °C; non devono essere scongelate e ricongelate più di una o due volte e la conservazione a temperature inferiori non ne prolunga la durata oltre quella del prodotto mantenuto a 2-8 °C.

Stoccaggio e stabilità

Si raccomanda di evitare cicli ripetuti di congelamento/scongelamento (non più di 2 volte).

Altre note

Da utilizzare solo per ricerca nelle scienze naturali. Non usare in procedure diagnostiche.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): nwg
• Punto d’infiammabilità (°F): No data available
• Punto d’infiammabilità (°C): No data available