2GFHSKB

Kit per PCR KAPA2G Fast HotStart

Mg and Mg-free buffers

• Codice UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Proprietà

• Livello qualitativo: 100
• impiego: sufficient for 1000 reactions; sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions; sufficient for 5000 reactions
• Durata: ≤18 mo.
• Caratteristiche: Fast PCR; dNTPs included: no; hotstart
• Confezionamento: pkg of 100 U (KK5523); pkg of 250 U (KK5503); pkg of 250 U (KK5513; Mg Free); pkg of 2500 U (KK5519); pkg of 500 U (KK5501); pkg of 500 U (KK5511; Mg Free)
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• tecniche: PCR: suitable
• input: purified DNA
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La DNA polimerasi KAPA2G Fast è un enzima ingegnerizzato di seconda generazione (2G), sviluppato a vantaggio di una processività e velocità più elevate e con velocità di estensione significativamente più alta rispetto alla Taq polimerasi wild-type. Oltre alla velocità, la KAPA2G Fast offre rese e sensibilità migliori su una vasta tipologia di bersagli rispetto agli altri enzimi. I kit KAPA2G Fast HotStart^® PCR kit sono stati concepiti per una PCR rapida, in cui i tempi di reazione totali sono più brevi del 20-70% di quelli dei saggi PCR tradizionali eseguiti con la Taq DNA polimerasi wild-type. Questo risultato può essere ottenuto senza sacrificare le prestazioni della reazione e non richiede l′uso termociclatori o consumabili speciali.

Applicazioni

Il kit KAPA2G Fast HotStart PCR kit è stato usato per:

• PCR rapida
• genotipizzazione
• quantificazione di librerie ChIP -Seq, (sequenze da immunoprecipitazione della cromatina)
• comuni PCR (reazioni a catena della polimerasi )

Azioni biochim/fisiol

La DNA polimerasi KAPA2G Fast genera frammenti di DNA che possiedono le stesse caratteristiche dei frammenti di DNA generati con la Taq DNA polimerasi wild-type. È adatta alle successive analisi di routine, come la digestione con enzimi di restrizione, i clonaggi e il sequenziamento. Analogamente alla Taqdi tipo wild, la KAPA2G Fast possiede attività 5′→3′ polimerasica e attività 5′→3′ esonucleasica. Non possiede invece attività 3′→5′ esonucleasica (proofreading). La fedeltà della KAPA2G Fast è simile a quella della Taqwild-type; che ha un tasso di errore di circa 1 ogni 1,7 x 10⁵ nucleotidi incorporati.

Caratteristiche e vantaggi

Riduzione fino al 75% dei tempi di ciclaggio

• Tempi di estensione di 1 solo secondo per kilobase
• Ampia copertura di bersagli ricchi di AT e GC

Alta velocità, prestazioni superiori

• Sensibilità a livello di singola copia per target complessi
• Rese più alte

Note rapide:

• I kit KAPA2G Fast HotStart^® PCR kit contengono la DNA polimerasi ingegnerizzata KAPA2G Fast HotStart sviluppata per la PCR rapida.
• Usare un tempo di estensione di 1 secondo per ampliconi di <1 kb e di 15 secondi/kb per ampliconi più lunghi, risparmiando dal 20 al 70% del tempo totale di reazione.
• Non sono necessari strumentazioni speciali o consumabili per PCR.
• Il sistema tampone ottimizzato migliora la resa, la specificità e la sensibilità, facilitando un annealing efficiente in un ampio range di lunghezze del primer, contenuti di GC e temperature di melting.
• Utilizzare 0,5 U di DNA polimerasi KAPA2G Fast HotStart per una reazione da 25 μL o una quantità inferiore per volumi più piccoli.
• Per una maggiore efficienza della reazione, non superare i 25 μL di volume di reazione.
• Il tampone è disponibile con e senza MgCl₂. Il tampone A KAPA2G contiene 1,5 mM di MgCl₂ alla concentrazione 1X_, mentre il tampone M KAPA2G è privo di Mg. A esclusione del contenuto di MgCl₂ , i due tamponi sono identici.
• I prodotti di reazione presentano una coda 3′-dA e possono essere clonati in vettori di clonaggio TA

Qualità

Per ogni lotto di DNA polimerasi KAPA2G Fast è assicurato un contenuto di proteine contaminanti <2% (saggio Agilent Protein 230). La miscela KAPA2G Fast ReadyMix^™ è sottoposta a rigorosi controlli di qualità, è priva di attività da eso- ed endonucleasi contaminanti e risponde a stringenti criteri per quanto riguarda la contaminazione da DNA.

Nota sulla preparazione

Assicurarsi sempre che il prodotto sia stato completamente scongelato e miscelato prima dell′uso. I reagenti possono essere conservati a 4 °C per l′uso a breve termine (fino a un mese). Riportare a -20 °C per la conservazione a lungo termine. A condizione che tutti i componenti siano stati manipolati con cautela e non abbiano subito alcuna contaminazione, il kit non è soggetto a compromissione se lasciato (non intenzionalmente) a temperatura ambiente per un breve periodo di tempo (fino a 3 giorni). Si sconsiglia la conservazione prolungata a temperatura ambiente e a 4 °C. Si ricorda che i reagenti conservati a temperature superiori a -20 °C sono più inclini alla degradazione in caso di contaminazione durante l′uso. Pertanto, la conservazione a tali temperature avviene a rischio e pericolo dell′utilizzatore.

Altre note

Per soli scopi di ricerca. Non usare a scopo diagnostico.

Note legali

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Solo come componenti del kit

• KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase 5 U/µL
• 5X KAPA2G Buffer A
• 5X KAPA2G Buffer M (Mg-free)
• KAPA MgCl₂ 25 mM

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS07,GHS08
• Avvertenze: Warning
• Indicazioni di pericolo: H302,H371,H412
• Consigli di prudenza: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Classi di pericolo: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): does not flash
• Punto d’infiammabilità (°C): does not flash