SCM015

Terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali (1x)

The Mesenchymal Stem Cell Expansion Medium (1x) has been optimized & validated for Stem cell culture. This medium is available in a 500mL format.

• Sinonimo/i: MSC growth medium, Stem cell culture medium
• Codice UNSPSC: 12352207
• eCl@ss: 32160801
• NACRES: NA.75

Proprietà

• Livello qualitativo: 200
• Forma fisica: liquid
• Produttore/marchio commerciale: Chemicon^®
• tecniche: cell culture | stem cell: suitable
• input: sample type mesenchymal stem cell(s)
• Condizioni di spedizione: dry ice

Descrizione

Applicazioni

Scongelamento delle cellule

1. Le cellule vanno scongelate solo dopo aver preparato a portata di mano il terreno raccomandato e l'appropriato materiale da laboratorio in plastica e/o vetro.
2. Prelevare la provetta con le cellule staminali mesenchimali dall'azoto liquido e incubare a 37 °C in un bagno termostatato. Verificare attentamente il completo scongelamento delle cellule. La vitalità cellulare massima si ottiene quando le cellule congelate vengono scongelate completamente in modo rapido. IMPORTANTE: non vortexare le cellule.
3. Quando le cellule sono completamente scongelate, disinfettare l'esterno della provetta con etanolo 70%. Procedere subito al passaggio successivo.
4. Sotto cappa a flusso laminare, utilizzare una pipetta da 1 o 2 mL per trasferire le cellule in una provetta conica sterile da 15 mL. Fare attenzione a non introdurre bolle d′aria durante la procedura di trasferimento.
5. Con una pipetta da 10 mL, aggiungere lentamente goccia a goccia 9 mL di terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali (preriscaldato a 37 °C) alla provetta conica da 15 mL. IMPORTANTE: non aggiungere il volume di terreno tutto in una volta, perché lo shock osmotico potrebbe compromettere la vitalità delle cellule.
6. Miscelare delicatamente prelevando ed erogando la sospensione cellulare con la pipetta per due volte. Fare attenzione a non introdurre bolle d′aria. IMPORTANTE: non vortexare le cellule.
7. Centrifugare la provetta a 300 x g per 2-3 minuti per pellettare le cellule.
8. Decantare quanto più surnatante possibile. I passaggi 4-8 sono indispensabili per rimuovere il crioconservante (DMSO) residuo.
9. Risospendere le cellule in un volume totale di 10 mL di terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali (preriscaldato a 37 °C).
10. Piastrare la miscela con le cellule in una piastra per colture tissutali da 10 cm.
11. Incubare le cellule a 37°C in un incubatore umidificato e 5% di CO₂.
12. Il giorno successivo, sostituire il terreno con altro terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali fresco (preriscaldato a 37 °C). Da questo momento, la sostituzione con terreno fresco va eseguita ogni due/tre giorni.
13. Quando le cellule hanno raggiunto una confluenza dell'80% circa, possono essere dissociate con Accutase^® e suddivise in altre piastre di coltura oppure congelate per usi successivi.

Suddivisione della coltura

1. Prestando cautela, aspirare il terreno dalla piastra per colture da 10 mL contenente lo strato confluente di cellule staminali mesenchimali.
2. Aggiungere 3-5 mL di Accutase e lasciare agire in un incubatore a 37 °C per 3 minuti.
3. Ispezionare la piastra e accertarsi che le cellule si siano staccate completamente picchiettandone delicatamente i lati con il palmo della mano. 4. Aggiungere 5 mL di terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali (preriscaldato a 37 °C) alla piastra.
5. Trasferire le cellule dissociate in una provetta conica da 15 mL.
6. Centrifugare la provetta a 300 x g per 2-3 minuti per pellettare le cellule.
7. Scartare il surnatante
8. Aggiungere 2 mL di terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali alla provetta conica e risospendere bene le cellule. IMPORTANTE: non vortexare.
9. Con un emocitometro contare le cellule.
10. Piastrare le cellule alla densità desiderata nei supporti appropriati (fiasche, piastre o pozzetti) a cui sia stato precedentemente aggiunto il terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali. Solitamente piastriamo le cellule alla densità di ~2 milioni di cellule/piastra da 10 cm o fiasca T75.

Qualità

Ogni lotto di terreno è testato per la crescita e la proliferazione ottimale delle cellule staminali mesenchimali. Test di sterilità: negativo

Stato fisico

Il terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali è una formulazione proprietaria che contiene siero fetale bovino.

Stoccaggio e stabilità

Il terreno di espansione per cellule staminali mesenchimali va conservato a -20 °C fino al momento dell'uso. Un volta scongelato, il terreno basale va conservato a 2-8 °C per non più di un mese.

Note legali

Accutase is a registered trademark of Innovative Cell Technologies, Inc.

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable