MAB19310-C

Anticorpo anti-aggrecano, scisso da MMP, clone AF-28, senza liquido ascitico

clone AF-28, from mouse

• Sinonimo/i: Aggrecan core protein, MMP-cleaved, Cartilage-specific proteoglycan core protein, MMP-cleaved, Chondroitin sulfate proteoglycan 1, MMP-cleaved, Chondroitin sulfate proteoglycan core protein 1, MMP-cleaved, CSPCP, MMP-cleaved
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: purified immunoglobulin
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: AF-28, monoclonal
• Reattività contro le specie: bovine, porcine, human, rat, mouse
• tecniche: immunohistochemistry: suitable (paraffin); western blot: suitable
• Isotipo: IgG1κ
• N° accesso NCBI: NP_037359
• N° accesso UniProt: P16112
• Condizioni di spedizione: wet ice
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified
• Informazioni sul gene: human ... ACAN(176)

Descrizione

Descrizione generale

La proteina “core” dell′aggrecano (UniProt P16112; detta anche cartilage-specific proteoglycan core protein, chondroitin sulfate proteoglycan 1, chondroitin sulfate proteoglycan core protein 1, CSPCP) nell′uomo è codificata dal gene ACAN (detto anche AGC1, CSPG1, MSK16, SEDK) (Gene ID 176). L′aggrecano è il principale proteoglicano della matrice extracellulare (ECM) nella cartilagine articolare che, insieme al collagene di tipo II, conferisce alla cartilagine le sue proprietà meccaniche di comprimibilità reversibile. L′aggrecano è composto da due domini globulari (G1 e G2) e un dominio interglobulare (IGD) interposto, a cui segue una regione estesa prima del terzo dominio globulare (G3). La regione tra G2 e G3 presenta numerose sostituzioni costituite da sGAG (glicosamminoglicano solfato) ed è ulteriormente suddivisa nelle regioni KS (cheratan solfato), CS1 (condroitin solfato 1) e CS2. La degradazione della ECM cartilaginea, aggrecano compreso, è un segno distintivo delle malattie artrosiche e delle lesioni articolari. Sono stati caratterizzati più siti di taglio nell′aggrecano, inclusi quelli nel dominio G1 (da parte della catepsina K), nel dominio IGD (da parte di aggrecanasi, calpaina e catepsine B e K) e nelle regioni KS (da parte di calpaina e delle MMP), CS1 (da parte di calpaina e delle MMP) e CS2 (da parte di aggrecanasi, calpaina, catepsina D e MMP). Inoltre, le diverse MMP presentano affinità differenziali per l′aggrecano - il sito IPEN-FFGV nel dominio IGD è tagliato dalle MMP 1–3, 7–9, 12–16, 19 e 20, la regione CS1 dell′aggrecano bovino è tagliata in più siti GVED-I/(L)SGL dalla MMP-3, e la parte terminale della regione CS2 dell′aggrecano bovino è tagliata nel sito RPAE-ARLE dalle MMP 2, 3, 7 e 12. La proteolisi dell′aggrecano nel dominio IGD determina una minor capacità di trattenere l′acqua da parte del tessuto a causa della perdita delle catene contenenti sGAG. Di contro, la proteolisi dell′aggrecano nelle regioni CS1 e CS2 costituisce un processo di turnover naturale della cartilagine matura e non influisce sulla funzionalità cartilaginea.

Specificità

Il clone AF-28 è un anticorpo monoclonale specifico per il sito di taglio in grado di riconoscere i polipeptidi di sequenza 345-FFGVG (numerazione basata sulla forma matura) presenti nella regione N-terminale dei frammenti di aggrecano scissi da MMP. All′immunoblotting, il clone AF-28 ha rilevato in modo specifico i frammenti G2 derivati dal substrato aggrecano G1-G2 digerito con stromelisina, collagenasi, gelatinasi e matrilisina, ma non ha rilevato i frammenti G2 scissi da elastasi, tripsina o catepsina B. Studi di competizione hanno confermato che il clone AF-28 non reagisce con i peptidi che contengono la sequenza interna FFGVG.

Immunogeno

Epitopo: sequenza N-terminale del neoepitopo FFGVG.

Peptide lineare (FFGVGGEED-C) coniugato con KLH corrispondente agli a.a. 361-369 della proteina “core” dell′aggrecano umano.

Applicazioni

Categoria di ricerca
Struttura cellulare

Questo anticorpo anti-aggrecano, scisso dalle metalloproteasi della matrice (MMP), clone AF-28, senza liquido ascitico è convalidato per l′uso nei saggi di Western blotting e immunoistochimica (paraffina) per la rivelazione dell′aggrecano.

Saggio immunoistochimico: un lotto rappresentativo alla diluizione 1:50 ha permesso di rivelare l′aggrecano scisso da MMP in tessuto cartilagineo umano.
Saggio immunoistochimico: l′aggrecano scisso da MMP è stato rivelato grazie a questo anticorpo in sezioni incluse in paraffina di tibia sia di topi wild-type che di topi con espressione diminuita di MMP-13 (Zhou, X., et al. (2010). Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107(29):12919-12924).
Saggio di Western blotting: con un lotto rappresentativo è stato rilevato un livello maggiore di frammenti FFGV scissi da MMP in campioni di cartilagine osteoartrosica (OA) rispetto al livello osservato nei campioni di cartilagine normale (Struglics, A., and Hansson, M. (2012). Biochem. J. 446(2):213-223).
Saggio di Western Blotting: un lotto rappresentativo ha permesso di rivelare il frammento G2 dopo digestione della regione G1-G2 ricombinante con MMP, ma non i frammenti non digeriti, digeriti con elastasi o tripsina (Mercuri, F.A., et al. (1999). J. Biol . Chem. 274(45):32387-32395).
Saggio di Western blotting: un lotto rappresentativo ha rivelato i frammenti digeriti con MMP-13 di aggrecano di origine umana e bovina, di ratto, di maiale ma non di squalo. Il clone AF-28 non ha identificato l′aggrecano non degradato (Fosang, A.J., et al. (1996). FEBS Lett. 380(1-2):17-20).
Saggio di Western blotting: con un lotto rappresentativo sono stati rivelati i frammenti di aggrecano generati in vitro dalla scissione con MMP e vari frammenti di aggrecano il liquido sinoviale di pazienti con artrite (Fosang, A.J., et al. (1995). Biochem. J. 310( Pt 1):337-343).

Sottocategoria di ricerca
Proteine dell′ECM

Qualità

Valutata mediante Western blotting su lisato di tessuto condrocitario umano.

Saggio di Western blotting: questo anticorpo alla concentrazione di 0,5 µg/mL ha permesso di rivelare l′aggrecano scisso da MMP in 10 µg di lisato di condrociti umani.

Descrizione del bersaglio

Visualizzato a ~200-260 kDa. I frammenti bersaglio risultano di dimensioni maggiori rispetto al peso molecolare calcolato a causa della glicosilazione. In alcuni lisati possono comparire una o più bande non caratterizzate.

Stato fisico

Formato: purificata

IgG1κ monoclonali di topo purificate in tampone contenente Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM con lo 0,05% di azoturo di sodio.

Purificato con proteina G.

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 1 anno dalla data di ricezione a 2-8 °C.

Altre note

Concentrazione: fare riferimento alla scheda tecnica specifica del lotto.

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1