17-10499
Kit Magna per MeRIP della m6A - Analisi della N6-Metiladenosina a livello del trascrittoma
Sinonimo/i:
Magna MeRIP m6A Kit, m6A Profiling Kit
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About This Item
Codice UNSPSC:
41105331
NACRES:
NA.84
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Livello qualitativo
Descrizione generale
La N6-metiladenosina (m6A) rappresenta un'abbondante modificazione dell'RNA conservata in molte specie diverse, dalle piante ai lieviti, ai mammiferi. Simile alla modificazione della 5-metilcitosina (5-mc) del DNA, l'm6A è una modificazione chimica reversibile dell'RNA. Le modificazioni dell'RNA m6A sono un argomento emergente nel controllo delle transizioni del destino cellulare nelle cellule staminali embrionali dei mammiferi. L'm6A è una delle modificazioni più diffuse sia negli mRNA che negli RNA non codificanti negli eucarioti, con una stima di 12.000 siti m6A in oltre 7.000 geni. Il marcatore è depositato da un eterodimero di proteine 3 e 14 simili alla metiltransferasi (Mettl3 e Mettl14) e può essere rimosso dagli enzimi RNA demetilasi FTO e ALKBH5. Il gene FTO associato al rischio di obesità codifica la prima demetilasi m6A identificata. Le mutazioni di questo gene sono state associate a un aumento del rischio di obesità e diabete di tipo II. Recentemente, l'alterazione dello stato di regolazione dell'm6A ha portato a una prolungata espressione del gene Nanog nelle cellule ES e all'incapacità di uscire dalle fasi di autorinnovamento verso la differenziazione.
L'immunoprecipitazione (MeRIP) dell'RNA metilato (m6A) è un metodo che consente di monitorare lo stato dell'm6A e mappare la posizione delle modificazioni dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Il kit Magna per MeRIP della m6A utilizza il metodo MeRIP per consentire l'identificazione e la caratterizzazione delle modifiche dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Nel saggio MeRIP, l'RNA subisce una frammentazione chimica che lo divide in frammenti di 100 nucleotidi o meno, seguita dall'immunoprecipitazione magnetica con un anticorpo monoclonale specifico per m6A. Dopo l'immunoprecipitazione, i frammenti di RNA isolati possono essere sottoposti a qRT-PCR o a sequenziamento dell'RNA (MeRIP-seq). Il protocollo semplificato è facile da eseguire e consente di ottenere risultati con elevati rapporti S/N.
L'immunoprecipitazione (MeRIP) dell'RNA metilato (m6A) è un metodo che consente di monitorare lo stato dell'm6A e mappare la posizione delle modificazioni dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Il kit Magna per MeRIP della m6A utilizza il metodo MeRIP per consentire l'identificazione e la caratterizzazione delle modifiche dell'RNA m6A a livello del trascrittoma. Nel saggio MeRIP, l'RNA subisce una frammentazione chimica che lo divide in frammenti di 100 nucleotidi o meno, seguita dall'immunoprecipitazione magnetica con un anticorpo monoclonale specifico per m6A. Dopo l'immunoprecipitazione, i frammenti di RNA isolati possono essere sottoposti a qRT-PCR o a sequenziamento dell'RNA (MeRIP-seq). Il protocollo semplificato è facile da eseguire e consente di ottenere risultati con elevati rapporti S/N.
Applicazioni
Il kit Magna per MeRIP della m6A semplifica il metodo di MeRIP (immunoprecipitazione dell'RNA metilato) per consentire l'identificazione e la caratterizzazione dei siti di metilazione dell'RNA m6A (N6-metiladenosina) a livello del trascrittoma. Adatto per le analisi MeRIP-Seq e qRT-PCR di trascritti di RNA metilato.
Componenti
Tampone per la frammentazione dell'RNA 10X (0,5 mL); EDTA 0,5 M (0,5 mL); tampone IP 5X (15 mL); miscela di sferette magnetiche coniugate con proteine A/G (315 μL); anti-N6-metiladenosina (m6A), clone 17-3-4-1 (100 μ); inibitore della RNasi (90 μL); IgG di topo normale (125 μg); primer di controllo positivo dell'EEF1A1 umano per MeRIP (75 μL); primer di controllo negativo dell'EEF1A1 umano per MeRIP (75 μL)
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