D4527
Désoxyribonucléase I from bovine pancreas
Type II, lyophilized powder, Protein ≥80 %, ≥2,000 units/mg protein
Synonyme(s) :
DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
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About This Item
Produits recommandés
Source biologique
bovine pancreas
Niveau de qualité
Type
Type II
Forme
lyophilized powder
Activité spécifique
≥2,000 units/mg protein
Poids mol.
~31 kDa
Produit purifié par
chromatography
Composition
Protein, ≥80%
Technique(s)
DNA extraction: suitable
Solubilité
0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
Adéquation
suitable for molecular biology
Application(s)
diagnostic assay manufacturing
diagnostic assay manufacturing
Activité étrangère
Chymotrypsin ≤0.01%
Protease ≤0.005%
RNase ≤0.01%
Conditions d'expédition
wet ice
Température de stockage
−20°C
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Application
La DNase I est utilisée en première étape pour couper l′ADN en vue de l′incorporation de bases marquées dans l′ADN. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée dans la solution mère de nucléase avec la RNase lors de la préparation de lysats de la lignée cellulaire MDCK II (Madin-Darby canine kidney II). Elle a également été utilisée pour l′extraction de l′ARN de virus Sindbis.
La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée pour l′identification, la localisation et l′expression de deux nouveaux gènes humains similaires à la désoxyribonucléase I. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude évaluant une nouvelle approche pour obtenir une RNase, une DNase, une cholestérol estérase et une trypsine hautement actives à partir de pancréas de bovin.
Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.
Actions biochimiques/physiologiques
La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester situées à côté de pyrimidines et produit des polynucléotides comportant des 5′-phosphates terminaux. En présence de Mg2+, la DNase I clive indépendamment chaque brin d′ADN et les sites de clivage sont répartis au hasard. Les deux brins d′ADN sont clivés à peu près au niveau du même site en présence de Mn2+. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn2+, Ca2+, Co2+ et Zn2+ activent l′enzyme. Une concentration de Ca2+ 5 mM permet de stabiliser l′enzyme vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase 1 de pancréas de bovin est composée de quatre éléments A, B, C et D, pouvant être distingués par chromatographie, dans des rapports molaires respectifs pour A, B et C de 4/1/1. D est présent en quantités très faibles. Il est bien connu que le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l′actine inhibent l′activité enzymatique.
Caractéristiques et avantages
Ce produit permet de couper et d'éliminer l'ADN présent dans les échantillons protéiques.
Définition de l'unité
Une unité Kunitz provoque une variation de A260 de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l′ADN de type I ou III.
Forme physique
Contient du chlorure de calcium
Notes préparatoires
La poudre d′enzyme peut être reconstituée dans de l′eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l′exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu′elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d′activité peut être d′environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active jusqu′à cinq heures à 60 °C entre pH 5 et pH 7, et devient inactive après < 10 minutes à 68 °C. Sa perte d′activité est de 6 %/heure dans un tampon d′acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.
Remarque sur l'analyse
Protéine déterminée par la réaction du biuret.
Inhibiteur
Réf. du produit
Description
Tarif
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Resp. Sens. 1
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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