MAB3391
Anticorps anti-collagène de type I, clone 5D8-G9
clone 5D8-G9, Chemicon®, from mouse
Synonyme(s) :
Anti-CAFYD, Anti-EDSARTH1, Anti-EDSC, Anti-OI1, Anti-OI2, Anti-OI3, Anti-OI4
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
mouse
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
purified immunoglobulin
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
5D8-G9, monoclonal
Espèces réactives
pig, canine, sheep, human, bovine
Ne doit pas réagir avec
guinea pig, ground squirrel, rat, kangaroo, horse, chicken, mouse
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
ELISA: suitable
flow cytometry: suitable
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotype
IgG1
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
wet ice
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Informations sur le gène
human ... COL1A1(1277)
Description générale
Les collagènes sont largement conservés au cours de l'évolution et ils sont caractérisés par la répétition ininterrompue du triplet "Glycine X Y" qui est un élément indispensable de la structure en triple hélice. Le collagène de type I (95 kDa) se trouve dans les os, la cornée, la peau et les tendons. Les mutations du gène codant sont associées à l'ostéogenèse imparfaite, au syndrome d'Ehlers Danlos et à l'ostéoporose idiopathique. Des translocations réciproques entre les chromosomes 17 et 22, où se trouvent ce gène et le gène du facteur de croissance dérivé des plaquettes bêta, sont associées à un type particulier de tumeur cutanée appelée dermatofibrosarcome protuberans, qui résulte d'une expression non régulée du facteur de croissance.
Spécificité
L'anticorps anti-collagène de type I est un anticorps IgG1 monoclonal qui se lie à un épitope proche de l'extrémité C-terminale du collagène de type I.
L'anticorps anti-collagène de type I montre une grande affinité avec les collagènes de type I humain, bovin et ovin. Il n'y a pas de signe de réactivité croisée avec les collagènes de types III, V et VI, ni avec les protéines du tissu conjonctif. L'anticorps réagit uniquement avec le collagène I natif non dénaturé
L'anticorps anti-collagène de type I montre une grande affinité avec les collagènes de type I humain, bovin et ovin. Il n'y a pas de signe de réactivité croisée avec les collagènes de types III, V et VI, ni avec les protéines du tissu conjonctif. L'anticorps réagit uniquement avec le collagène I natif non dénaturé
Application
Domaine de recherche
Structure cellulaire
Structure cellulaire
ELISA : détection du collagène natif de type I. Capture : 2 à 4 µg/ml. Détection : une concentration de 10 µg/ml d'anticorps anti-collagène de type I permet de détecter 50 ng de collagène humain de type I sans aucune réactivité croisée avec les autres types de collagène. Une concentration d'anticorps plus élevée pourrait être nécessaire pour détecter des concentrations de collagène plus faibles. Remarque : l'anticorps ne se lie pas avec lui-même.
Immunohistochimie : coupes non-fixées congelées :
Couper des sections d'une épaisseur de 6 µm à partir d'échantillons congelés à l'aide d'un microtome à congélation. Laisser sécher complètement à l'air libre. Réhydrater avec du PBS. Le blocage n'est généralement pas nécessaire pour les analyses en IF. En cas d'utilisation de DAB, il est suggéré d'effectuer un prétraitement à la peroxydase et le blocage avec 2 % de BSA dans du PBS permet de réduire le bruit de fond.
Diluer l'anticorps anti-collagène de type I dans du PBS, ajouter à/aux échantillon(s) et incuber pendant 60 minutes. (1/100e-1/500e).
Laver les coupes deux fois dans du PBS pendant 10 minutes. Ajouter l'anticorps anti-souris conjugué au FITC et incuber pendant 60 minutes.
Laver deux fois dans du PBS pendant 10 minutes.
Monter les coupes sur un mélange glycérol/eau (9/1 v/v) contenant de la 1,4-phénylènediamine 1 mM. (pour la stabilité du FITC ou utiliser les références produit Chemicon 5096 ou 5013.)
REMARQUE :
des études préliminaires suggèrent que le marquage renforcé de certains tissus pourrait être obtenu par traitement (avant l'étape 2) des coupes avec différentes enzymes (p. ex., pepsine à 0,1 % dans 0,1 M DE HCl à 37 °C pendant 5 minutes).
Cytométrie en flux : dilution au 1/100e
Immunoblotting : dilution au 1/1 000e en utilisant uniquement des Western blots natifs, non dénaturés et non réduits. Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. L'anticorps ne fonctionne pas dans les Western blots classiques réduits.
Les gels PAGE doivent être préparés pour l'analyse des collagènes natifs.
Un gel séparateur d'acrylamide total à 3 % (p/v), contenant 3,2 % (p/p) de bis-acrylamide en proportion d'un monomère comme agent de réticulation, dans du lactate de calcium 10 mM (pH 6,8) est polymérisé entre des plaques de verre verticales par l'ajout de 0,05 à 0,1 % de TEMED et de 0,05 à 0,1 % de persulfate d'ammonium (ajouté à partir d'une solution mère à 10 %). Le tampon de cathode (négatif) est un tampon Tris 50 mM ajusté à un pH de 6,6 avec de l'acide lactique ; le tampon anodique (positif) est un tampon d'acide lactique 0,1 M, pH 2,5 {Friis, S.J. et al., 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.}.
Avant le chargement de l'échantillon, le gel est maintenu pendant au moins 90 minutes à 100 V. Les échantillons de collagène sont dissous à 1 mg/ml soit dans 0,1 M d'acide lactique, soit dans 0,1 M d'acide acétique contenant 10 % de saccharose et 5 à 10 µg sont appliqués par piste. Du vert de méthyle est ajouté selon les besoins pour aider le chargement. L'électrophorèse se déroule à 70 V pendant 5 heures à température ambiante.
Le blotting utilise de l'acide lactique 0,1 M (pH 2,5) et est réalisé à 20 V pendant 16 heures à température ambiante, avec une migration des collagènes vers la cathode.
Immunohistochimie : coupes non-fixées congelées :
Couper des sections d'une épaisseur de 6 µm à partir d'échantillons congelés à l'aide d'un microtome à congélation. Laisser sécher complètement à l'air libre. Réhydrater avec du PBS. Le blocage n'est généralement pas nécessaire pour les analyses en IF. En cas d'utilisation de DAB, il est suggéré d'effectuer un prétraitement à la peroxydase et le blocage avec 2 % de BSA dans du PBS permet de réduire le bruit de fond.
Diluer l'anticorps anti-collagène de type I dans du PBS, ajouter à/aux échantillon(s) et incuber pendant 60 minutes. (1/100e-1/500e).
Laver les coupes deux fois dans du PBS pendant 10 minutes. Ajouter l'anticorps anti-souris conjugué au FITC et incuber pendant 60 minutes.
Laver deux fois dans du PBS pendant 10 minutes.
Monter les coupes sur un mélange glycérol/eau (9/1 v/v) contenant de la 1,4-phénylènediamine 1 mM. (pour la stabilité du FITC ou utiliser les références produit Chemicon 5096 ou 5013.)
REMARQUE :
des études préliminaires suggèrent que le marquage renforcé de certains tissus pourrait être obtenu par traitement (avant l'étape 2) des coupes avec différentes enzymes (p. ex., pepsine à 0,1 % dans 0,1 M DE HCl à 37 °C pendant 5 minutes).
Cytométrie en flux : dilution au 1/100e
Immunoblotting : dilution au 1/1 000e en utilisant uniquement des Western blots natifs, non dénaturés et non réduits. Ramshaw, et.al (1988) "Electrophoretic and electroblotting of native collagens." Anal. Biochem. 168:82-87. L'anticorps ne fonctionne pas dans les Western blots classiques réduits.
Les gels PAGE doivent être préparés pour l'analyse des collagènes natifs.
Un gel séparateur d'acrylamide total à 3 % (p/v), contenant 3,2 % (p/p) de bis-acrylamide en proportion d'un monomère comme agent de réticulation, dans du lactate de calcium 10 mM (pH 6,8) est polymérisé entre des plaques de verre verticales par l'ajout de 0,05 à 0,1 % de TEMED et de 0,05 à 0,1 % de persulfate d'ammonium (ajouté à partir d'une solution mère à 10 %). Le tampon de cathode (négatif) est un tampon Tris 50 mM ajusté à un pH de 6,6 avec de l'acide lactique ; le tampon anodique (positif) est un tampon d'acide lactique 0,1 M, pH 2,5 {Friis, S.J. et al., 1985 J Biochem Biophys Methods 10:301-306.}.
Avant le chargement de l'échantillon, le gel est maintenu pendant au moins 90 minutes à 100 V. Les échantillons de collagène sont dissous à 1 mg/ml soit dans 0,1 M d'acide lactique, soit dans 0,1 M d'acide acétique contenant 10 % de saccharose et 5 à 10 µg sont appliqués par piste. Du vert de méthyle est ajouté selon les besoins pour aider le chargement. L'électrophorèse se déroule à 70 V pendant 5 heures à température ambiante.
Le blotting utilise de l'acide lactique 0,1 M (pH 2,5) et est réalisé à 20 V pendant 16 heures à température ambiante, avec une migration des collagènes vers la cathode.
L'utilisation de cet anticorps anti-collagène de type I, clone 5D8-G9, est validée en ELISA, en FC, en WB et en IH pour la détection du collagène de type I.
Sous-domaine de recherche
Protéines de la MEC
Protéines de la MEC
Forme physique
100 µg d'anticorps purifié à une concentration de 1 mg/ml dans du Tris acétate 50 mM, NaCl 150 mM et 0,1 % de Bronidox (pH 5,5).
La fraction d'immunoglobuline a été purifiée par chromatographie avec protéine A et s'est révélée pure à > 95 % par PAGE avec coloration coomassie. L'anticorps anti-collagène de type I est livré filtré à 0,22 micron.
La fraction d'immunoglobuline a été purifiée par chromatographie avec protéine A et s'est révélée pure à > 95 % par PAGE avec coloration coomassie. L'anticorps anti-collagène de type I est livré filtré à 0,22 micron.
Format : Produit purifié
Stockage et stabilité
L'anticorps anti-collagène de type I est expédié sous forme liquide à température ambiante. Ce produit est stable jusqu'à 6 mois s'il est conservé à une température comprise entre 2 et 8 °C.
ATTENTION : Le réactif monoclonal contient 0,1 % d'azoture de sodium en guise de conservateur. En raison des dangers liés à l'accumulation de cette substance dans les canalisations, le réactif usagé doit être dilué dans beaucoup d'eau avant d'être rejeté.
ATTENTION : Le réactif monoclonal contient 0,1 % d'azoture de sodium en guise de conservateur. En raison des dangers liés à l'accumulation de cette substance dans les canalisations, le réactif usagé doit être dilué dans beaucoup d'eau avant d'être rejeté.
Remarque sur l'analyse
Témoin
Lysat rénal humain
Lysat rénal humain
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
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Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
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