Tests de recherche des mycoplasmes dans l'industrie pharmaceutique
La contamination par des mycoplasmes est un problème fréquent et récurrent pour bon nombre de systèmes de culture cellulaire en recherche en sciences de la vie et dans l'industrie pharmaceutique. Les mycoplasmes peuvent proliférer dans les milieux de culture jusqu'à atteindre des titres élevés, sans présenter les signes de contamination bactérienne typiques, comme la turbidité. Leurs effets sur les cellules cultivées sont par exemple une altération du métabolisme, un ralentissement de la prolifération et des anomalies chromosomiques. En bref, une contamination par des mycoplasmes compromet la validité des données relatives aux lignées cellulaires affectées et des résultats de recherche en sciences de la vie. Il est donc fondamental, pour la recherche basée sur des cellules et la production des produits pour lesquels la santé du consommateur est une préoccupation essentielle, de rechercher les mycoplasmes et de maintenir les cultures cellulaires exemptes de contamination.
À propos des bactéries du genre Mycoplasma
Les mycoplasmes font partie des bactéries les plus petites connues à ce jour ; elles sont capables de passer à travers des filtres de pores de 0,2 µm. Ces micro-organismes se multiplient en conditions aérobies, mais peuvent aussi croître en conditions anaérobies.
Les mycoplasmes sont des bactéries à la fois parasites et saprophytes. Plusieurs espèces, notamment M. pneumoniae, sont pathogènes et provoquent chez l'homme des pneumonies et d'autres affections respiratoires. M. genitalium serait impliqué dans les maladies inflammatoires pelviennes. Les mycoplasmes sont des bactéries dépourvues de paroi cellulaire et ne sont donc pas sensibles aux pénicillines et autres antibiotiques qui agissent sur cette structure. Afin de stabiliser leur membrane cytoplasmique, la plupart des mycoplasmes utilisent des stérols, qu'ils prélèvent dans leur environnement, généralement du cholestérol tiré de leurs hôtes animaux. Un grand nombre de souches de mycoplasmes tolèrent aussi divers autres antibiotiques.
Sources de contamination par des mycoplasmes
Les sources de contamination par des mycoplasmes au laboratoire et en production sont très difficiles à maîtriser. Certaines espèces sont présentes sur la peau humaine et peuvent être introduites dans les cultures à cause de mauvaises pratiques aseptiques. De plus, des mycoplasmes peuvent être introduits via des suppléments contaminés, tels que le sérum de veau fœtal, ou plus communément via une transmission par d'autres cultures cellulaires contaminées. Une fois présents dans une culture cellulaire, ces microbes peuvent se répandre rapidement et contaminer d'autres zones du laboratoire au travers des aérosols et des particules générés lors de la manipulation des cultures. Un strict respect des bonnes pratiques aseptiques de laboratoire est essentiel, et il est hautement recommandé de tester en routine les cultures à la recherche de mycoplasmes pour lutter efficacement contre la contamination dans les zones de production.
Pourquoi rechercher les mycoplasmes dans l'industrie pharmaceutique ?
Les installations biopharmaceutiques qui utilisent des cellules eucaryotes pour produire des vaccins doivent tester leurs banques de cellules et leurs lots de semences virales ainsi que que leurs vaccins en vrac, afin de détecter toute éventuelle contamination par des mycoplasmes. Les espèces de ce genre bactérien infectent les cellules eucaryotes et perturbent leur croissance et leur métabolisme. L'interférence des mycoplasmes avec la production de vaccins peut affecter la qualité des protéines et leur rendement et, plus grave, provoquer des effets secondaires chez les patients recevant le vaccin final.
La contamination d'un bioréacteur par des mycoplasmes peut entraîner une perte importante en termes de temps, de matières et de revenus, à moins qu'elle ne soit identifiée tôt dans le procédé de fabrication. Sans analyses rigoureuses de routine, il est extrêmement difficile de découvrir une contamination par des mycoplasmes dans des lots de production biopharmaceutique, car la présence de ces bactéries ne provoque généralement aucune variation de pH ni aucune turbidité visuelle dans les milieux de culture. Les méthodes d'analyse des mycoplasmes des pharmacopées utilisent, pour la détection, des tests à la fois sur des cellules en culture et sur des cellules indicatrices. Si seulement deux milieux sont employés pour l'analyse, il est recommandé d'associer le milieu FREY et le milieu FRIIS.
Méthodes d'analyse des mycoplasmes
Il est important de rechercher la présence de mycoplasmes dans les produits biopharmaceutiques, les vaccins, les cultures cellulaires et les cultures de virus en différents points lors du contrôle qualité. Les trois méthodes de test les plus communes sont :
- La culture de mycoplasmes, méthode dans laquelle des milieux de culture de bactéries optimisés pour les mycoplasmes sont inoculés avec les échantillons à tester.
- La méthode avec coloration de l'ADN, dans laquelle les noyaux des mycoplasmes sont contre-colorés avec du colorant Hoechst ou du DAPI et visualisés par microscopie à fluorescence.
- La PCR (amplification en chaîne par polymérase), qui amplifie l'ADN bactérien lorsque des mycoplasmes sont présents dans l'échantillon.
Déroulement de la détection des mycoplasmes selon la Ph. Eur. 2.6.7 et l'USP 63
* Durant les jours suivant l'inoculation, repiquer chaque milieu liquide en inoculant 0,2 ml à au moins 1 plaque de chaque milieu solide. Répéter la procédure entre le 6e et le 8e jour, puis entre le 13e et le 15e jour, puis de nouveau entre le 19e et le 21e jour du test. Observer les milieux liquides tous les 2 ou 3 jours, et en cas de changement de couleur, procéder à un repiquage.
Remarque : Il est également nécessaire de prévoir un contrôle positif et un contrôle négatif par milieu gélosé et par milieu liquide, avec un temps d'incubation de 14 jours.
Milieux prêts à l'emploi pour la détection des mycoplasmes selon les pharmacopées
Nous proposons une offre complète de milieux de culture liquides et gélosés, prêts à l'emploi, nécessaires à la détection des mycoplasmes selon la Pharmacopée européenne 6.1 (2.6.7.) et l'USP 35 (63). Sans autre étape de préparation, nos milieux de culture pour mycoplasmes prêts à l'emploi garantissent un produit de qualité constante et une traçabilité complète avec un certificat d'analyse spécifique à chaque lot.
Du fait des ingrédients qu'ils contiennent, les milieux pour mycoplasmes ont des durées de conservation bien plus courtes que la plupart des autres milieux de culture destinés au contrôle qualité microbiologique. La durée de conservation de nos milieux liquides et gélosés prêts à l'emploi de type Friis, Frey et Hayflick a été étendue à 4 mois pour les géloses et 6 mois pour les bouillons. Découvrez notre gamme complète de milieux de culture prêts à l'emploi avec une durée de conservation plus longue, conçue pour faciliter la recherche des mycoplasmes.
À la Une
Pour continuer à lire, veuillez vous connecter à votre compte ou en créer un.
Vous n'avez pas de compte ?