Analyses cliniques et médicolégales
Les analyses cliniques sont une source cruciale d'informations essentielles qui influent sur les décisions prises en matière de santé humaine. Les principaux types de tests diagnostiques utilisés par les laboratoires d'analyse clinique sont soit des tests de diagnostic in vitro (IVD), soit des tests développés en laboratoire (LDT pour "lab developed test"). Ces tests examinent un vaste éventail d'analytes issus de divers types d'échantillons pour fournir d'importantes informations diagnostiques. Les laboratoires cliniques assurent également le criblage des médicaments, le suivi thérapeutique pharmacologique et l'identification des drogues. L'analyse médicolégale vient généralement en soutien du système judiciaire dans le cadre d'enquêtes et autres procédures juridiques.
Les principales solutions d'analyse proposées sont les immunoessais tels que les tests ELISA et l'immunohistochimie (IHC), les techniques de diagnostic moléculaire comme la PCR, la qPCR et le séquençage, et les techniques de chimie analytique, notamment la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS).
- Rôle des tests développés en laboratoire (LDT) dans l'analyse de diagnostic clinique en laboratoire
- Tests développés en laboratoire (LDT) - analyses courantes et types d'échantillon
- Suivi thérapeutique pharmacologique
- Dépistage de drogues – types d'échantillon/de test et solutions d'analyse
- Toxicologie – applications en analyse clinique et en médecine légale
Articles techniques apparentés
- The method shown uses HILIC mode on an Ascentis® Express OH5 column to retain both analytes well, making it very likely to be more robust and reliable, as well as highly MS-friendly.
- This Sigma-Aldrich article continues to detail new methodology for the analysis of Vitamin D metabolites using HybridSPE-Phospholipid technology.
- Separation of Pyridoxine Hydrochloride (B6), analytical standard; Thiamine Hydrochloride (B1), analytical standard
- Regardless of next-generation sequencing (NGS) platform, universal and index adapter sequences are required for the proper assembly of sample fragments.
- We offer over 200 custom DNA oligos modification for both DNA, RNA oligonucleotides and sequencing to probes for gene.
- Afficher tout (22)
Protocoles apparentés
- Thyroid hormones play critical roles in the regulation of biological processes, such as growth, metabolism, protein synthesis, and brain development. For a clinical laboratory, fast and reliable measurements of total hormone levels are important for the diagnosis and monitoring of thyroid diseases.
- his study demonstrates the analysis of Warfarin in plasma samples utilizing chiral and achiral (reversed-phase) LC-MS and effective sample prep to remove endogenous phospholipids
- LC/MS/MS Analysis of Interacting Cardiac Drugs Digoxin, Quinidine, Amiodarone and Verapamil on Titan™ C18
- LC/MS/MS Analysis of Epinephrine, Metanephrine and Metabolites on Ascentis® Express OH5
- Afficher tout (9)
Les LDT sont une solution d'analyse essentielle du laboratoire clinique, même s'ils ne représentent généralement qu'une petite partie de son activité. Ils viennent en complément des nombreux tests de diagnostic in vitro (IVD) proposés.
Les LDT répondent typiquement aux besoins du marché de l'analyse clinique qui ne peuvent être couverts par les tests IVD actuellement disponibles, ou bien offrent une valeur ajoutée par rapport à leurs équivalents IVD. Dans certains cas, ils répondent aux besoins d'analyse ésotériques des pathologies rares pour lesquelles le développement commercial de tests IVD n'est pas justifié. Dans d'autres cas, les LDT constituent une réponse rapide aux maladies infectieuses émergentes, comme ce fut le cas avec la pandémie de SARS-CoV-2 (COVID-19).
L'une des différences notables entre le LDT et le test IVD est la responsabilité que le laboratoire prend dans le développement et la gestion de ces LDT, qui lui donnent la flexibilité et l'agilité nécessaires pour répondre aux besoins pour lesquels il n'existe à l'heure actuelle aucune solution satisfaisante.
Les LDT peuvent s'appuyer sur un vaste choix de solutions d'analyse, mais les principaux reposent sur : la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS), les techniques de diagnostic moléculaire (MDx) telles que la PCR quantitative (qPCR) et le séquençage de nouvelle génération (NGS), et les approches du type immunoessai (IA) comme les tests ELISA (essais immuno-enzymatiques).
Chez l'homme, les analyses courantes sont généralement pratiquées sur le sang et l'urine pour les tests de routine, et sur les cheveux, les poils ou la salive dans certains cas particuliers comme le dépistage de drogues.
Le suivi thérapeutique pharmacologique joue un rôle important dans le cadre des programmes de traitement critiques, en permettant de contrôler l'observance et/ou de garantir la sécurité des patients. Par exemple, ce suivi peut servir à s'assurer que les concentrations du médicament administré dans le cadre d'un traitement sont efficaces et sans danger. Voici quelques exemples de médicaments pouvant faire l'objet d'un suivi :
- Antibiotiques
- Médicaments destinés aux problèmes cardiaques
- Médicaments anti-épileptiques
- Médicaments destinés aux maladies auto-immunes
- Médicaments destinés aux troubles bipolaires
Un suivi thérapeutique pharmacologique est inclus dans les approches cliniques de la gestion de la douleur chez les patients, pour vérifier l'observance du programme de traitement et limiter le risque d'abus de certains médicaments, comme les opioïdes.
Le dépistage de drogues identifie la présence de drogues illicites ou le détournement de médicaments sur ordonnance pour des raisons légales, pour assurer la sécurité des patients et/ou dans le cadre d'un contrat de travail. Les drogues et médicaments typiquement recherchés sont les suivants :
- Amphétamines : méthamphétamine, amphétamine
- Barbituriques : phénobarbital, sécobarbital, pentobarbital, butalbital, amobarbital
- Benzodiazépines : diazépam, lorazépam, oxazépam, témazépam, alprazolam
- Cannabinoïdes : marijuana
- Cocaïne : cocaïne et/ou son métabolite (benzoylecgonine)
- Méthadone : méthadone, métabolite de la méthadone (EDDP)
- Opiacés : codéine, morphine, métabolite de l'héroïne, oxycodone, oxymorphone, hydrocodone, hydromorphone
- Phéncyclidine : PCP
Une approche typique peut consister en un test de dépistage urinaire associé à un test sanguin de confirmation.
La toxicologie englobe le suivi thérapeutique pharmacologique et les analyses de dépistage de drogues dans les laboratoires cliniques, ainsi que l'analyse des échantillons prélevés sur les scènes de crime et le travail d'enquête des laboratoires de médecine légale. Les types d'échantillon analysés dans un cadre médico-légal proviennent de sources plus variées, mais nombre des techniques analytiques mises en œuvre en aval sont similaires et dépendent avant tout des analytes recherchés.
L'analyse par LC-MS débute avec le prélèvement de l'échantillon et peut comprendre une étape de préparation de l'échantillon avant la séparation, la détection et la quantification. La préparation de l'échantillon peut impliquer des traitements enzymatiques, un lavage de l'échantillon par filtration, un enrichissement ou d'autres étapes de purification. La séparation de l'échantillon intervient durant les étapes de chromatographie en phase liquide (LC), suite à quoi l'analyte est détecté et quantifié par spectrométrie de masse (MS). L'étalonnage de l'instrument et le référencement de l'analyte par comparaison avec des étalons adaptés constituent une partie cruciale de ce processus. Les matériaux de référence certifiés et les étalons analytiques jouent un rôle essentiel dans une analyse par LC-MS.
L'analyse par LC-MS est fréquemment employée pour diverses raisons, notamment :
- Suivi thérapeutique pharmacologique
- Dépistage de drogues
- Analyse métabolique
- Contrôle hormonal
- Contrôle des vitamines
- Dépistage néonatal
Exemples de matériel utilisé à chaque étape :
- Prélèvement et préparation des échantillons
- Dispositifs de filtration
- Flacons d'analyse
- Enzymes – Bêta-glucuronidase
- Pointes, plaques et colonnes d'extraction en phase solide (SPE)
- Pointes, plaques et colonnes de microextraction en phase solide (SPME)
- Séparation des échantillons
- Colonnes et accessoires de HPLC
- Solvants de HPLC
- Réactifs de chromatographie
- Détection et quantification des échantillons
- Matériaux de référence certifiés
- Étalons analytiques
L'analyse par PCR débute avec le prélèvement de l'échantillon et peut comprendre une étape de purification suivie d'une étape d'amplification spécifique d'un ADN/ARN cible. Dans le cas de la qPCR, la quantification se fait en temps réel durant les cycles d'amplification. La qPCR est parfois appelée RT-PCR de par son déroulement en temps réel (RT en anglais). Une autre solution est la PCR en point final, où les résultats sont déterminés après les cycles d'amplification.
L'analyse par PCR est indiquée dans toutes les situations nécessitant de connaître la présence, la longueur ou la séquence d'un ADN ou d'un ARN. Il peut s'agir par exemple des cas suivants :
- Dépistage et identification de maladies infectieuses
- Dépistage génétique
- Oncologie
- Dépistage prénatal
Matériel de PCR :
- Purification des échantillons
- Kits et réactifs de purification d'acides nucléiques (NAP)
- Amplification des échantillons
- Oligonucléotides, amorces, sondes
- Enzymes d'amplification de l'ADN (Taq par exemple)
- Enzymes de transcription inverse (RT)
- Réactifs d'amplification par PCR, notamment tampons, sels et nucléotides (dNTP)
Le test ELISA (essai immuno-enzymatique) est une technique d'immuno-essai très répandue qui permet de cribler et de quantifier à haut débit des anticorps, des protéines, des peptides et d'autres petites molécules.
Le test ELISA peut convenir à un vaste éventail d'applications d'analyse, notamment :
- Oncologie
- Maladies infectieuses
- Dépistage de drogues
- Quantification d'hormones
- Fonction immunitaire / immunologie
Les test ELISA se font généralement sur une plaque, le format à 96 puits étant le plus courant. Ces plaques peuvent être fournies prêtes à l'emploi (IVD) ou développées en interne (LDT). Produits couramment utilisés pour créer une plaque ELISA du type sandwich :
- Plaque ELISA
- Anticorps de capture
- Réactifs d'enrobage, par ex. BSA, caséine, etc.
- Tampons de lavage
Matériel typiquement utilisé après préparation de la plaque :
- Préparation des échantillons
- Réactifs de lyse
- Tampons
- Détergents
- Inhibiteurs de protéases
- Fixation/lavage des échantillons
- Tampons, par ex. PBS, PBS-T
- Détection
- Anticorps de détection primaires, spécifiques à l'analyte recherché
- Anticorps marqués/conjugués secondaires, par ex. marqués à la phosphatase alcaline (PAL ou ALP) ou à la peroxydase de raifort (HRP)
- Réactifs de détection d'anticorps marqués, par ex. TMB, OPD, pNPP et peroxyde d'hydrogène
- Réactif d'arrêt
Déroulement d'une analyse par LC-MS
Préparation des échantillons
Pour une analyse efficace et exacte, il est essentiel de procéder à une préparation efficace des échantillons. Vous pouvez améliorer votre analyse et protéger votre instrument en concentrant et en purifiant vos échantillons.
- SPE
- Extraction en phase solide en ligne et analyse par LC-MS d'hormones thyroïdiennes dans du sérum humain
- Analyse chirale et achirale par LC-MS de la Warfarine™ dans des échantillons de plasma
- Optimisation de méthode pour l'analyse par LC-MS de paires critiques de métabolites de la vitamine D dans du sérum
- SPME
Standardisation et étalonnage
Les matériaux de référence sont un élément critique des procédures d'analyse, et plus généralement des programmes d'assurance qualité. Vos instruments et vos essais doivent être qualifiés et étalonnés.
- Produits pharmaceutiques
- Substances illicites
- Analyse par LC/MS des métabolites de l'éthanol dans l'urine sur une colonne Ascentis® Express OH5 après dilution avec des étalons internes deutérés
- Analyse par LC/MS de métabolites du type glucuronide d'opioïde dans l'urine sur une colonne Ascentis® Express F5 après extraction en phase solide (SPE) avec un tube Supel™-Select HLB
- Analyse par UHPLC/MS du diazépam et de ses métabolites sur une colonne Titan™ C18, comparaison du débit et de la longueur de colonne
- Biomarqueurs
Séparation et analyse chromatographique
Les colonnes, les solvants, les réactifs et les accessoires ont un effet crucial sur l'exactitude, la fiabilité et l'efficacité de votre analyse. Vous pouvez exploiter les ressources techniques à votre disposition pour optimiser votre approche.
- Solvants
- Colonnes et accessoires de HPLC
- Réactifs de spectroscopie
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