Saltar al contenido
Merck
  • Conformationally sensitive proximity of extracellular loops 2 and 4 of the γ-aminobutyric acid (GABA) transporter GAT-1 inferred from paired cysteine mutagenesis.

Conformationally sensitive proximity of extracellular loops 2 and 4 of the γ-aminobutyric acid (GABA) transporter GAT-1 inferred from paired cysteine mutagenesis.

The Journal of biological chemistry (2014-10-24)
Maram Hilwi, Oshrat Dayan, Baruch I Kanner
RESUMEN

The sodium- and chloride-coupled GABA transporter GAT-1 is a member of the neurotransmitter:sodium:symporters, which are crucial for synaptic transmission. Structural work on the bacterial homologue LeuT suggests that extracellular loop 4 closes the extracellular solvent pathway when the transporter becomes inward-facing. To test whether this model can be extrapolated to GAT-1, cysteine residues were introduced at positions 359 and 448 of extracellular loop 4 and transmembrane helix 10, respectively. Treatment of HeLa cells, expressing the double cysteine mutant S359C/K448C with the oxidizing reagent copper(II)(1,10-phenantroline)3, resulted in a significant inhibition of [(3)H]GABA transport. However, transport by the single cysteine mutant S359C was also inhibited by the oxidant, whereas its activity was almost 4-fold stimulated by dithiothreitol. Both effects were attenuated when the conserved cysteine residues, Cys-164 and/or Cys-173, were replaced by serine. These cysteines are located in extracellular loop 2, the role of which in the structure and function of the eukaryotic neurotransmitter:sodium:symporters remains unknown. The inhibition of transport of S359C by the oxidant was markedly reduced under conditions expected to increase the proportion of inward-facing transporters, whereas the reactivity of the mutants to a membrane-impermeant sulfhydryl reagent was not conformationally sensitive. Our data suggest that extracellular loops 2 and 4 come into close proximity to each other in the outward-facing conformation of GAT-1.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Cloruro de colina, ≥98%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-cisteína, 97%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-cisteína, from non-animal source, BioReagent, suitable for cell culture, ≥98%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Cloruro de colina, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥98%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
γ-Aminobutyric acid, ≥99%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-cisteína, BioUltra, ≥98.5% (RT)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Cloruro de colina, ≥99%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
SAFC
L-cisteína
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
D-Gluconic acid solution, 49-53 wt. % in H2O
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
D-Gluconic acid sodium salt, ≥99% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Potassium D-gluconate, ≥99% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Cloruro de colina, BioUltra, ≥99.0% (AT)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
γ-Aminobutyric acid, BioXtra, ≥99%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-cisteína, ≥97%, FG
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
USP
Potassium gluconate, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-cisteína, produced by Wacker Chemie AG, Burghausen, Germany, ≥98.0%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Iron(II) D-gluconate dihydrate, 98%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
USP
Cloruro de colina, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Magnesium D-gluconate hydrate, ≥98% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Sodium gluconate, meets USP testing specifications
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Potassium gluconate, 97.0-103.0% dry basis, meets USP testing specifications
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
γ-Aminobutyric acid, analytical standard
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
L-cisteína, certified reference material, TraceCERT®, Manufactured by: Sigma-Aldrich Production GmbH, Switzerland
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
Potassium gluconate, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
Cloruro de colina, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Supelco
D-Gluconic acid sodium salt, certified reference material, TraceCERT®, Manufactured by: Sigma-Aldrich Production GmbH, Switzerland
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Magnesium D-gluconate hydrate, 98.0-102% anhydrous basis, meets USP testing specifications
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Vigabatrin impurity D, European Pharmacopoeia (EP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad