Saltar al contenido
Merck

Oligomycin-induced proton uncoupling.

Toxicology in vitro : an international journal published in association with BIBRA (2020-06-06)
Abby Hearne, Haotong Chen, Anna Monarchino, Jeffrey S Wiseman
RESUMEN

Oligomycin is a classical mitochondrial reagent that binds to the proton channel on the Fo component of ATP synthase. As a result, oligomycin blocks mitochondrial ATP synthesis, proton translocation, and O2 uptake. Here we show that oligomycin induces proton uncoupling subsequent to inhibition of ATP synthesis, as evidenced by recovery of O2 uptake to near baseline levels. Uncoupling is uniquely rapid and readily observed in HepG2 cells but is also observed at longer times in the unrelated H1299 cell line. Proton fluxes plateau at oligomycin concentrations in the region 0.25-5 μM. At the plateau, fluxes are lower than expected for the classical mitochondrial permeability transition pore, although in H1229 cells, fluxes increase to levels consistent with pore opening at higher oligomycin concentrations. Uncoupling is observed in cells metabolizing either pyruvate or lactate and reversed by addition of glucose to restore ATP synthesis. Uncoupling is not sensitive to cyclosporin A and is not reversed by the ANT inhibitor bongkrekic acid. However, bongkrekic acid inhibits uncoupling if added before oligomycin, which we interpret in terms of maintenance of mitochondrial ATP levels.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa solution, 45% in H2O, sterile-filtered, BioXtra, suitable for cell culture
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Antimycin A from Streptomyces sp.
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Oligomicina A, ≥99% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Rotenone, ≥95%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone, ≥98% (TLC), powder
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-lactato de sodio, ~98%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium, Without glucose, L-glutamine, phenol red, sodium pyruvate and sodium bicarbonate, powder, suitable for cell culture
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
EPPS, ≥99.5% (titration)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Cyclosporin A, from Tolypocladium inflatum, ≥95% (HPLC), solid
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Bongkrekic acid solution, from Pseudomonas cocovenenans, ≥95% (HPLC), ~1 mg/mL
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
2,3-Dimethoxy-1,4-naphthoquinone, ≥99%, solid
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Bz-423, ≥98% (HPLC)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad