11465015001
Roche
Kit de proliferación celular II (XTT)
liquid, pkg of 1 kit, suitable for cell analysis, suitable for tissue culture
Sinónimos:
xtt
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About This Item
Código UNSPSC:
12352200
Productos recomendados
formulario
liquid
Nivel de calidad
uso
sufficient for ≤2,500 tests
envase
pkg of 1 kit
fabricante / nombre comercial
Roche
condiciones de almacenamiento
protect from light
técnicas
tissue culture: suitable
λmáx.
450-500 nm
aplicaciones
cell analysis
detection
método de detección
colorimetric
temp. de almacenamiento
−20°C
Descripción general
El kit de proliferación celular II (XTT) es un ensayo colorimétrico para la cuantificación no radiactiva de la proliferación, la viabilidad y la citotoxicidad celulares. El material de la muestra consiste en células adherentes o células en suspensión cultivadas en microplacas de 96 pocillos.
En los ensayos colorimétricos se analiza el número de células viables por la hidrólisis de las sales de tetrazolio añadidas al medio de cultivo. Esta técnica no requiere lavado ni recolección de células y todo el ensayo, desde el microcultivo hasta el análisis de los datos con un lector de ELISA, se realiza en la misma microplaca.
Más recientemente se describió la sal de tetrazolio XTT. Al contrario que con la MTT, el producto de hidrólisis de la XTT es soluble en agua; por consiguiente no se precisa una etapa de solubilización. La sal de tetrazolio XTT es hidrolizada a formazán por medio de un complejo mecanismo celular. Esta biorreducción se produce sólo en células viables y está relacionada con la producción de NAD(P)H durante la glucólisis. Por consiguiente, la cantidad del colorante formazán formado muestra una correlación directa con el número de células metabólicamente activas en el cultivo.
En los ensayos colorimétricos se analiza el número de células viables por la hidrólisis de las sales de tetrazolio añadidas al medio de cultivo. Esta técnica no requiere lavado ni recolección de células y todo el ensayo, desde el microcultivo hasta el análisis de los datos con un lector de ELISA, se realiza en la misma microplaca.
Más recientemente se describió la sal de tetrazolio XTT. Al contrario que con la MTT, el producto de hidrólisis de la XTT es soluble en agua; por consiguiente no se precisa una etapa de solubilización. La sal de tetrazolio XTT es hidrolizada a formazán por medio de un complejo mecanismo celular. Esta biorreducción se produce sólo en células viables y está relacionada con la producción de NAD(P)H durante la glucólisis. Por consiguiente, la cantidad del colorante formazán formado muestra una correlación directa con el número de células metabólicamente activas en el cultivo.
Aplicación
El kit para proliferación celular II (XTT) se utiliza para la cuantificación espectrofotométrica no radiactiva de la proliferación y la viabilidad celulares en poblaciones celulares utilizando el formato de placas de 96 pocillos. Puede utilizarse para:
- Medida de la proliferación celular en respuesta a factores de crecimiento, citocinas, mitógenos y nutrientes.
- Analizar de compuestos citotóxicos y citostáticos, como los medicamentos anticancerosos y otros compuestos farmacéuticos
- Evaluar los anticuerpos inhibidores del crecimiento y los mediadores fisiológicos que inhiben el crecimiento celular.
- Analizar la biocompatibilidad de varios andamios empleados en la ingeniería del tejido óseo para el crecimiento de células óseas.
- ensayo de viabilidad celular.
Características y beneficios
- Seguridad y facilidad: Se evita la utilización de isótopos radiactivos, etapas de lavado y otros reactivos.
- Precisión: La absorbancia obtenida muestra una fuerte correlación con el número de células.
- Sensibilidad: Se detectan células en pequeña cantidad.
- Rapidez: Se puede procesar un gran número de muestras utilizando un lector de ELISA múltiple.
Envase
1 kit que contiene 2 componentes.
Principio
El ensayo se basa en la escisión de la sal de tetrazolio XTT en presencia de un reactivo de acoplamiento electrónico produciendo una sal de formazán soluble. Esta conversión sólo se produce en células viables. Las células cultivadas en placas de cultivo tisular de 96 pocillos se incuban con la mezcla de marcaje XTT durante 2 a 20 horas. Después de este periodo de incubación, se determina cuantitativamente el colorante formazán formado con un espectrofotómetro de barrido de múltiples pocillos (lector de ELISA). La absorbancia medida se relaciona directamente con el número de células viables.
Los ensayos de proliferación celular y de viabilidad son de particular importancia en las aplicaciones habituales de biología celular. Las sales de tetrazolio (MTT, XTT, WST-1) son particularmente útiles para este tipo de análisis. Las sales de tetrazolio son hidrolizadas para formar formazán por medio del sistema de la succinato-tetrazolio reductasa (EC 1.3.99.1), que pertenece a la cadena respiratoria de las mitocondrias, y está activo sólo en las células metabólicamente intactas.
Los ensayos de proliferación celular y de viabilidad son de particular importancia en las aplicaciones habituales de biología celular. Las sales de tetrazolio (MTT, XTT, WST-1) son particularmente útiles para este tipo de análisis. Las sales de tetrazolio son hidrolizadas para formar formazán por medio del sistema de la succinato-tetrazolio reductasa (EC 1.3.99.1), que pertenece a la cadena respiratoria de las mitocondrias, y está activo sólo en las células metabólicamente intactas.
Nota de preparación
Disolución de trabajo: Preparación de las disoluciones
Descongele el reactivo de marcaje XTT y el reactivo de acoplamiento electrónico en un baño María a 37 °C. Mezcle bien cada vial hasta obtener una disolución transparente.
Mezcla de marcaje XTT
Para realizar un ensayo de proliferación celular (XTT) con una microplaca (96 pocillos), mezcle 5 ml de reactivo de marcaje XTT con 0,1 ml de reactivo de acoplamiento electrónico.
Nota: Para obtener resultados fiables descongele y mezcle el reactivo de marcaje XTT y el reactivo de acoplamiento electrónico inmediatamente antes de usarlos.
Instrucciones de trabajo
Las células se cultivan en microplacas (calidad de cultivo celular, 96 pocillos, fondo plano) en un volumen final de 100 μl de medio de cultivo por pocillo, en función de los requisitos de medios de las células en una atmósfera humidificada (por ejemplo, 37 °C, CO2 al 6, 5% ).
El periodo de incubación de los cultivos celulares depende del enfoque experimental concreto y de la línea celular utilizada para el ensayo.. Para la mayoría de las configuraciones experimentales, la incubación de las células durante 24 a 96 horas es apropiada.
Después del periodo de incubación, añada a cada pocillo 50 μl de la mezcla de marcaje XTT preparada como se acaba de describir (concentración final de XTT 0,3 mg/ml).
Incumbe la microplaca durante 4 a 24 horas en una atmósfera humidificada (por ejemplo, 37 °C, CO2 el 6,5 % ).
Nota: El tiempo de incubación varía en función de cada configuración experimental (por ejemplo, el tipo de célula y la concentración celular utilizados). Por consiguiente, recomendamos medir la absorción como se ha descrito en diferentes momentos después de añadir la mezcla de marcaje XTT (por ejemplo, 4, 6, 8, 12 y 18 horas) utilizando la misma microplaca para determinar el periodo de incubación óptimo de la configuración concreta del experimento.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Descongele los reactivos inmediatamente antes de utilizarlos. Se recomienda preparar alícuotas apropiadas [se requieren 5 ml de reactivo de marcaje XTT y 0,1 ml de reactivo de acoplamiento electrónico para la realización del ensayo con una microplaca (96 pocillos)]
Nota: Evite la descongelación y la congelación repetidas.
Descongele el reactivo de marcaje XTT y el reactivo de acoplamiento electrónico en un baño María a 37 °C. Mezcle bien cada vial hasta obtener una disolución transparente.
Mezcla de marcaje XTT
Para realizar un ensayo de proliferación celular (XTT) con una microplaca (96 pocillos), mezcle 5 ml de reactivo de marcaje XTT con 0,1 ml de reactivo de acoplamiento electrónico.
Nota: Para obtener resultados fiables descongele y mezcle el reactivo de marcaje XTT y el reactivo de acoplamiento electrónico inmediatamente antes de usarlos.
Instrucciones de trabajo
Las células se cultivan en microplacas (calidad de cultivo celular, 96 pocillos, fondo plano) en un volumen final de 100 μl de medio de cultivo por pocillo, en función de los requisitos de medios de las células en una atmósfera humidificada (por ejemplo, 37 °C, CO2 al 6, 5% ).
El periodo de incubación de los cultivos celulares depende del enfoque experimental concreto y de la línea celular utilizada para el ensayo.. Para la mayoría de las configuraciones experimentales, la incubación de las células durante 24 a 96 horas es apropiada.
Después del periodo de incubación, añada a cada pocillo 50 μl de la mezcla de marcaje XTT preparada como se acaba de describir (concentración final de XTT 0,3 mg/ml).
Incumbe la microplaca durante 4 a 24 horas en una atmósfera humidificada (por ejemplo, 37 °C, CO2 el 6,5 % ).
Nota: El tiempo de incubación varía en función de cada configuración experimental (por ejemplo, el tipo de célula y la concentración celular utilizados). Por consiguiente, recomendamos medir la absorción como se ha descrito en diferentes momentos después de añadir la mezcla de marcaje XTT (por ejemplo, 4, 6, 8, 12 y 18 horas) utilizando la misma microplaca para determinar el periodo de incubación óptimo de la configuración concreta del experimento.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): Descongele los reactivos inmediatamente antes de utilizarlos. Se recomienda preparar alícuotas apropiadas [se requieren 5 ml de reactivo de marcaje XTT y 0,1 ml de reactivo de acoplamiento electrónico para la realización del ensayo con una microplaca (96 pocillos)]
Nota: Evite la descongelación y la congelación repetidas.
Otras notas
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.
Solo componentes del kit
Referencia del producto
Descripción
- XTT Labeling Reagent
- Electron-coupling Reagent
Producto relacionado
Referencia del producto
Descripción
Precios
Código de clase de almacenamiento
12 - Non Combustible Liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
nwg
Punto de inflamabilidad (°F)
does not flash
Punto de inflamabilidad (°C)
does not flash
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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