AB5188
Anticuerpo anti-canal de potasio Kv3.1b
Chemicon®, from rabbit
Sinónimos:
Anti-EPM7, Anti-KV3.1, Anti-KV4, Anti-NGK2
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About This Item
Código UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41
Productos recomendados
origen biológico
rabbit
Nivel de calidad
forma del anticuerpo
affinity purified immunoglobulin
tipo de anticuerpo
primary antibodies
clon
polyclonal
purificado por
affinity chromatography
reactividad de especies
mouse, rat
fabricante / nombre comercial
Chemicon®
técnicas
immunohistochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable
Nº de acceso NCBI
Nº de acceso UniProt
Condiciones de envío
dry ice
modificación del objetivo postraduccional
unmodified
Información sobre el gen
mouse ... Kcnc1(16502)
Especificidad
Reconoce una proteína Kv3.1b de longitud completa. No experimenta reacción cruzada con otros antígenos del canal de potasio probados hasta la fecha.
Inmunógeno
Péptido purificado de Kv3.1b de rata (aminoácidos 567-585) (Accession P25122).
Aplicación
Este anticuerpo anti-canal de potasio Kv3.1b está validado para ser utilizado en IH, IP y WB para la detección del canal de potasio Kv3.1b.
Inmunotransferencia Western: 1:200 utilizando ECL en membranas cerebrales de rata.
Inmunohistoquímica en cortes cerebrales de rata.
Inmunoprecipitación
Las diluciones deben hacerse utilizando una proteína transportadora como BSA (1-3%)
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
PROTOCOLO PARA INMUNOHISTOQUÍMICA
Sacrificio y procesamiento de tejidos:
Las ratas se anestesian profundamente con pentobarbital sódico (Pental). El cerebro se fija por perfusión transcardial, primero con 50 ml de disolución salina tamponada con fosfato (PBS 0,02 M, pH 7,4) que contiene heparina (5 U/ml), luego con 220 ml de paraformaldehído al 4% enfríado en hielo PBS 0,1 M, pH 7,5 que contiene un 4 % de sacarosa. El cerebro se corta en bloques coronales y se fija por inmersión en el mismo fijador, refrigerado, durante 1-2 horas. Los bloqueos de cerebro se transfieren a sacarosa al 10 % en PBS 0,1 M y se corta en un criostato en el plazo de 3 días. Los cortes de cerebro, de 30 μm de grosor, se dejan flotar en PBS 0,1 M y luego se conservan en un tampón de crioconservación a -20°C. El tampón de crioconservación contiene un 40 % de etilenglicol y polivinilpirrolidona al 1 % en tampón de acetato de potasio 0,1M, pH 6,5.
Procedimiento de tinción:
1. Los cortes flotantes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
2. La actividad peroxidasa endógena se apaga por incubación con peróxido de hidrógeno al 0,2 % en tampón de fosfato 0.1 M pH 7,3 que contiene Tritón X-100 al 0,2 % durante 25 minutos a temperatura ambiente.
3. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
4. Los cortes se incuban con el antisuero primario en un medio que contenga Tritón X-100 al 0,3 %, Tween 20 al 0,05 %, suero de burro sano (NDS) al 4%, durante 1 hora a temperatura ambiente y luego refrigerado durante la noche.
5. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
Los cortes se incuban con anticuerpo de burro anti-conejo biotinilado (de Chemicon USA, número de referencia AP182B) diluido 1:400 en PBS 0,02 M, que contiene Triton X-100 al 0,3 %, Tween 20 al 0,05 % y NDS al 4 %, durante 1 hora a temperatura ambiente y luego refrigerados durante la noche.
1. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M que contiene NDS al 4 %, 2x 5 minutos.
2. Los cortes se incuban con extravidina-peroxidasa (nº de ref. Sigma E2886) diluida 1:100 en PBS 0,02 M, durante 45 minutos a temperatura ambiente.
3. Los cortes enjuagan en PBS 0,02 M, 3x 5 minutos.
Desarrollo del color:
1. Los cortes se incuban con una disolución de diaminobencidina a la concentración del 0,0125 % y que contiene sulfato de níquel y amonio al 0,05 % durante 10 minutos a temperatura ambiente.
2. Los cortes se transfieren a la misma disolución DAB pero con peróxido de hidrógeno añadido a una concentración final del 0,0015 %. El usuario final deberá ajustar la duración de la incubación.
3. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 4x 10 minutos.
4. Los cortes se montan en portaobjetos de vidrio (gelatinizados o recubiertos con cualquier otro tipo de material adhesivo) y se dejan secar.
5. Los cortes se deshidratan en series ascendentes de concentraciones de etanol (70%, 90%, 100%, 5 minutos en cada una), se deslipidan en xileno (10 minutos) y se cubren los portaobjetos en Permount (o cualquier otro adhesivo diluido de xileno).
Inmunohistoquímica en cortes cerebrales de rata.
Inmunoprecipitación
Las diluciones deben hacerse utilizando una proteína transportadora como BSA (1-3%)
El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.
PROTOCOLO PARA INMUNOHISTOQUÍMICA
Sacrificio y procesamiento de tejidos:
Las ratas se anestesian profundamente con pentobarbital sódico (Pental). El cerebro se fija por perfusión transcardial, primero con 50 ml de disolución salina tamponada con fosfato (PBS 0,02 M, pH 7,4) que contiene heparina (5 U/ml), luego con 220 ml de paraformaldehído al 4% enfríado en hielo PBS 0,1 M, pH 7,5 que contiene un 4 % de sacarosa. El cerebro se corta en bloques coronales y se fija por inmersión en el mismo fijador, refrigerado, durante 1-2 horas. Los bloqueos de cerebro se transfieren a sacarosa al 10 % en PBS 0,1 M y se corta en un criostato en el plazo de 3 días. Los cortes de cerebro, de 30 μm de grosor, se dejan flotar en PBS 0,1 M y luego se conservan en un tampón de crioconservación a -20°C. El tampón de crioconservación contiene un 40 % de etilenglicol y polivinilpirrolidona al 1 % en tampón de acetato de potasio 0,1M, pH 6,5.
Procedimiento de tinción:
1. Los cortes flotantes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
2. La actividad peroxidasa endógena se apaga por incubación con peróxido de hidrógeno al 0,2 % en tampón de fosfato 0.1 M pH 7,3 que contiene Tritón X-100 al 0,2 % durante 25 minutos a temperatura ambiente.
3. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
4. Los cortes se incuban con el antisuero primario en un medio que contenga Tritón X-100 al 0,3 %, Tween 20 al 0,05 %, suero de burro sano (NDS) al 4%, durante 1 hora a temperatura ambiente y luego refrigerado durante la noche.
5. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 2x 5 minutos.
Los cortes se incuban con anticuerpo de burro anti-conejo biotinilado (de Chemicon USA, número de referencia AP182B) diluido 1:400 en PBS 0,02 M, que contiene Triton X-100 al 0,3 %, Tween 20 al 0,05 % y NDS al 4 %, durante 1 hora a temperatura ambiente y luego refrigerados durante la noche.
1. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M que contiene NDS al 4 %, 2x 5 minutos.
2. Los cortes se incuban con extravidina-peroxidasa (nº de ref. Sigma E2886) diluida 1:100 en PBS 0,02 M, durante 45 minutos a temperatura ambiente.
3. Los cortes enjuagan en PBS 0,02 M, 3x 5 minutos.
Desarrollo del color:
1. Los cortes se incuban con una disolución de diaminobencidina a la concentración del 0,0125 % y que contiene sulfato de níquel y amonio al 0,05 % durante 10 minutos a temperatura ambiente.
2. Los cortes se transfieren a la misma disolución DAB pero con peróxido de hidrógeno añadido a una concentración final del 0,0015 %. El usuario final deberá ajustar la duración de la incubación.
3. Los cortes se enjuagan en PBS 0,02 M, 4x 10 minutos.
4. Los cortes se montan en portaobjetos de vidrio (gelatinizados o recubiertos con cualquier otro tipo de material adhesivo) y se dejan secar.
5. Los cortes se deshidratan en series ascendentes de concentraciones de etanol (70%, 90%, 100%, 5 minutos en cada una), se deslipidan en xileno (10 minutos) y se cubren los portaobjetos en Permount (o cualquier otro adhesivo diluido de xileno).
Nota de análisis
Control
ANTÍGENO DE CONTROL: gratis con el anticuerpo se incluyen 40 μg de antígeno de control (polvo liofilizado en disolución salina tamponada con fosfato, pH 7,4, que contiene sacarosa al 5 % y azida sódica al 0,025 %). La disolución de reserva del antígeno puede prepararse utilizando 200 μl de agua desionizada estéril. Para el control negativo, preincube 1 μg de péptido con 1 μg de anticuerpo durante una hora a temperatura ambiente. El usuario final debe determinar las concentraciones óptimas.
ANTÍGENO DE CONTROL: gratis con el anticuerpo se incluyen 40 μg de antígeno de control (polvo liofilizado en disolución salina tamponada con fosfato, pH 7,4, que contiene sacarosa al 5 % y azida sódica al 0,025 %). La disolución de reserva del antígeno puede prepararse utilizando 200 μl de agua desionizada estéril. Para el control negativo, preincube 1 μg de péptido con 1 μg de anticuerpo durante una hora a temperatura ambiente. El usuario final debe determinar las concentraciones óptimas.
Otras notas
Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.
Información legal
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Código de clase de almacenamiento
11 - Combustible Solids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 3
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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Diego Cotella et al.
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Testing null
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