17-10409
Biosensor Lentiviral de control por RFP LentiBrite
Sinónimos:
RFP Lentiviral Biosensor
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About This Item
Código UNSPSC:
12352207
eCl@ss:
34360190
NACRES:
NA.51
Productos recomendados
fabricante / nombre comercial
Chemicon®
LentiBrite
Nivel de calidad
técnicas
cell based assay: suitable
immunocytochemistry: suitable
immunofluorescence: suitable
transfection: suitable
método de detección
fluorometric
Condiciones de envío
dry ice
Descripción general
Lea nuestra nota de aplicación en Nature Methods!
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf (¡Pulse aquí!)
Conozca más sobre las ventajas de nuestros biosensores lentivirales LentiBrite! Pulse aquí
Los biosensores pueden utilizarse para detectar la presencia o la ausencia de una proteína particular así como la localización subcelular de esa proteína en una célula viva. Suelen desearse etiquetas fluorescentes como un medio para visualizar la proteína de interés dentro de una célula mediante microscopia de fluorescencia o captura de vídeos de lapso de tiempo. La visualización de las células vivas sin interrupciones permite a los investigadores observar las condiciones celulares en tiempo real.
Los sistemas de vectores lentivirales son una popular herramienta de investigación que se utiliza para introducir productos génicos en las células. La transfección lentiviral tiene ventajas sobre los métodos no víricos como la transfección química, incluida la transfección de mayor eficiencia de células en división y no división, la expresión estable prolongada del transgén, y la inmunogenicidad baja.
EMD Millipore presenta los biosensores lentivirales LentiBrite, un nuevo conjunto de partículas lentivirales preempaquetadas que codifican proteínas importantes y fundamentales de autofagia, apoptosis y estructura celular para su visualización en diferentes estados celulares/patológicos en análisis de células vivas e in vitro.
Las partículas lentivirales LentiBrite de control por RFP de EMD Millipore proporcionan una fluorescencia brillante para permitir el análisis de células vivas en tipos de células difíciles de transfectar.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf (¡Pulse aquí!)
Conozca más sobre las ventajas de nuestros biosensores lentivirales LentiBrite! Pulse aquí
Los biosensores pueden utilizarse para detectar la presencia o la ausencia de una proteína particular así como la localización subcelular de esa proteína en una célula viva. Suelen desearse etiquetas fluorescentes como un medio para visualizar la proteína de interés dentro de una célula mediante microscopia de fluorescencia o captura de vídeos de lapso de tiempo. La visualización de las células vivas sin interrupciones permite a los investigadores observar las condiciones celulares en tiempo real.
Los sistemas de vectores lentivirales son una popular herramienta de investigación que se utiliza para introducir productos génicos en las células. La transfección lentiviral tiene ventajas sobre los métodos no víricos como la transfección química, incluida la transfección de mayor eficiencia de células en división y no división, la expresión estable prolongada del transgén, y la inmunogenicidad baja.
EMD Millipore presenta los biosensores lentivirales LentiBrite, un nuevo conjunto de partículas lentivirales preempaquetadas que codifican proteínas importantes y fundamentales de autofagia, apoptosis y estructura celular para su visualización en diferentes estados celulares/patológicos en análisis de células vivas e in vitro.
- Preempaquetadas, etiquetadas fluorescentemente con GFP y RFP
- Transfección de mayor eficacia en comparación con los métodos tradicionales de transfección química y otros métodos de transfección no víricos
- Capacidad para transfectar células en división, células no en división y tipos de células difíciles de transfectar, como las células primarias o las células madre
- Sin alterar la función celular
Las partículas lentivirales LentiBrite de control por RFP de EMD Millipore proporcionan una fluorescencia brillante para permitir el análisis de células vivas en tipos de células difíciles de transfectar.
El uso de proteínas fluorescentes codificadas genéticamente ha revolucionado la biología celular al permitir la adquisición de imágenes en tiempo real de células y estructuras subcelulares. Se dispone de una gama diversa de proteínas fluorescentes, pero esas proteínas varían en cuanto a su idoneidad para la adquisición de imágenes de células vivas. En el biosensor lentiviral de control por RFP LentiBriteTM de EMD Millipore se emplea TagRFP, una proteína monómera fluorescente roja (naranja) generada a partir del RFP de la anémona de mar Entacmaea quadricolor. Exhibe fluorescencia con máximos de excitación/emisión a 555/584 nm respectivamente, y un brillo que es casi tres veces superior al de mCherry, lo que lo convierte en una de las proteínas fluorescentes monómeras rojas más brillantes del mercado. Las partículas lentivirales de control por RFP LentiBrite de EMD Millipore proporcionan una fluorescencia brillante para permitir el análisis de células vivas en tipos de células difíciles de transfectar.
Aplicación
Microscopia de fluorescencia
Obtención de imágenes:
(Véase la Figura 1 en la ficha técnica)
Las células HeLa se sembraron en placa en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales a un MOI de 40 durante 24 horas. Tras la sustitución del medio y 48 horas más de incubación, las células se fijaron con formaldehído y se montaron. Las imágenes se obtuvieron por microscopia de fluorescencia de campo amplio con aceite de inmersión. El RFP-Control muestra una distribución fluorescente roja uniforme en las células.
Comparación mediante inmunocitoquímica:
(Véase la Figura 2 en la ficha técnica)
Similar a la Figura 1 (véase ficha técnica), se sembraron en placa células U2OS en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales a un MOI de 40 durante 24 horas. Después de 24 horas, se sustituyeron los medios y las células se incubaron otras 48 horas.
Tipos de células difíciles de transfectar:
(Véase la Figura 3 en la ficha técnica)
Se sembraron en placa tipos de células primarias HUVEC o HuMSC en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales RFP-control a un MOI de 40 durante 24 horas.
Otros tipos de células:
(Véase la Figura 4 de la ficha técnica)
Las células neuronales corticales primarias de rata fueron tratadas como en la Figura 1 (véase la ficha técnica).
Para obtener una visualización fluorescente óptima, se recomienda analizar el nivel de expresión deseado en un plazo de 24-48 horas tras la transfección/infección para un análisis óptimo de las células vivas, ya que la intensidad de la fluorescencia puede atenuarse con el tiempo, especialmente en líneas celulares difíciles de transfectar. Las células infectadas pueden congelarse después de una transfección/infección exitosa y descongelarse en cultivo para retener la expresión fluorescente positiva más allá de las 24-48 horas. La longitud y la intensidad de la expresión fluorescente varía de unas líneas celulares a otras. Es posible que se requieran MOI más altas para líneas celulares difíciles de transfectar.
Obtención de imágenes:
(Véase la Figura 1 en la ficha técnica)
Las células HeLa se sembraron en placa en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales a un MOI de 40 durante 24 horas. Tras la sustitución del medio y 48 horas más de incubación, las células se fijaron con formaldehído y se montaron. Las imágenes se obtuvieron por microscopia de fluorescencia de campo amplio con aceite de inmersión. El RFP-Control muestra una distribución fluorescente roja uniforme en las células.
Comparación mediante inmunocitoquímica:
(Véase la Figura 2 en la ficha técnica)
Similar a la Figura 1 (véase ficha técnica), se sembraron en placa células U2OS en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales a un MOI de 40 durante 24 horas. Después de 24 horas, se sustituyeron los medios y las células se incubaron otras 48 horas.
Tipos de células difíciles de transfectar:
(Véase la Figura 3 en la ficha técnica)
Se sembraron en placa tipos de células primarias HUVEC o HuMSC en un portaobjetos de cámara y se transdujeron con partículas lentivirales RFP-control a un MOI de 40 durante 24 horas.
Otros tipos de células:
(Véase la Figura 4 de la ficha técnica)
Las células neuronales corticales primarias de rata fueron tratadas como en la Figura 1 (véase la ficha técnica).
Para obtener una visualización fluorescente óptima, se recomienda analizar el nivel de expresión deseado en un plazo de 24-48 horas tras la transfección/infección para un análisis óptimo de las células vivas, ya que la intensidad de la fluorescencia puede atenuarse con el tiempo, especialmente en líneas celulares difíciles de transfectar. Las células infectadas pueden congelarse después de una transfección/infección exitosa y descongelarse en cultivo para retener la expresión fluorescente positiva más allá de las 24-48 horas. La longitud y la intensidad de la expresión fluorescente varía de unas líneas celulares a otras. Es posible que se requieran MOI más altas para líneas celulares difíciles de transfectar.
Categoría de investigación
Estructura celular
Estructura celular
Subcategoría de investigación
Todas
Todas
Componentes
Lentivirus TagRFP:
Un vial que contiene 25 µl de partículas lentivirales a un mínimo de 3 x 10E8 unidades infecciosas (IFU) por ml.
Para obtener información sobre la concentración específica del lote, consulte la “Concentración vírica” específica del lote en las especificaciones del producto de la ficha técnica.
Promotor
EF-1 (factor de elongación-1)
Multiplicidad de la infección (MOI)
MOI = Cociente entre el número de partículas lentivirales infecciosas (IFU) y el número de células infectadas.
Los valores típicos del MOI para una elevada eficiencia de transducción e intensidad de señal están en el intervalo de 20 a 40. Para este objetivo, algunos tipos de células pueden requerir MOI más bajos (por ejemplo, las células HT-1080, HeLa, U2OS y las células madre mesenquimatosas humanas (HuMSC)), mientras que otros pueden requerir MOI más elevados (por ejemplo, las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC)).
NOTA: El usuario final debe valorar y optimizar el MOI para cada tipo de célula y diana lentiviral para lograr la eficiencia de transducción y la intensidad de la señal deseadas.
Un vial que contiene 25 µl de partículas lentivirales a un mínimo de 3 x 10E8 unidades infecciosas (IFU) por ml.
Para obtener información sobre la concentración específica del lote, consulte la “Concentración vírica” específica del lote en las especificaciones del producto de la ficha técnica.
Promotor
EF-1 (factor de elongación-1)
Multiplicidad de la infección (MOI)
MOI = Cociente entre el número de partículas lentivirales infecciosas (IFU) y el número de células infectadas.
Los valores típicos del MOI para una elevada eficiencia de transducción e intensidad de señal están en el intervalo de 20 a 40. Para este objetivo, algunos tipos de células pueden requerir MOI más bajos (por ejemplo, las células HT-1080, HeLa, U2OS y las células madre mesenquimatosas humanas (HuMSC)), mientras que otros pueden requerir MOI más elevados (por ejemplo, las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC)).
NOTA: El usuario final debe valorar y optimizar el MOI para cada tipo de célula y diana lentiviral para lograr la eficiencia de transducción y la intensidad de la señal deseadas.
Calidad
Evaluada mediante transducción de células HT-1080 y obtención de imágenes fluorescentes para evaluar la eficacia de la transducción.
Forma física
Precipitación PEG
Almacenamiento y estabilidad
Almacenamiento y manipulación
El lentivirus es estable durante un mínimo de 4 meses a partir de la fecha de recepción si se conserva a -80°C. Después de la primera descongelación, colóquelo inmediatamente sobre hielo y congélelo en alícuotas de trabajo a -80°C. Las alícuotas congeladas pueden conservarse durante al menos 2 meses. Una congelación/descongelación ulterior puede dar lugar a una disminución del título del virus y de la eficacia de la transducción.
NOTA DE SEGURIDAD IMPORTANTE
No se sabe que los vectores lentivirales de replicación defectuosa, como el vector de tercera generación suministrado en este producto, causen enfermedades en humanos o animales. Sin embargo, los lentivirus pueden integrarse en el genoma de la célula hospedadora y plantear así cierto riesgo de mutagénesis insercional. El material pertenece al grupo de riesgo 2 y debe manipularse bajo controles BSL2. Se proporciona información detallada sobre bioseguridad de los vectores lentivirales en Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
El lentivirus es estable durante un mínimo de 4 meses a partir de la fecha de recepción si se conserva a -80°C. Después de la primera descongelación, colóquelo inmediatamente sobre hielo y congélelo en alícuotas de trabajo a -80°C. Las alícuotas congeladas pueden conservarse durante al menos 2 meses. Una congelación/descongelación ulterior puede dar lugar a una disminución del título del virus y de la eficacia de la transducción.
NOTA DE SEGURIDAD IMPORTANTE
No se sabe que los vectores lentivirales de replicación defectuosa, como el vector de tercera generación suministrado en este producto, causen enfermedades en humanos o animales. Sin embargo, los lentivirus pueden integrarse en el genoma de la célula hospedadora y plantear así cierto riesgo de mutagénesis insercional. El material pertenece al grupo de riesgo 2 y debe manipularse bajo controles BSL2. Se proporciona información detallada sobre bioseguridad de los vectores lentivirales en Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Información legal
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Código de clase de almacenamiento
10 - Combustible liquids
Clase de riesgo para el agua (WGK)
WGK 2
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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