Preparación de los medios
La preparación de los medios de cultivo celular afecta de manera significativa al crecimiento de las células de mamíferos y a los resultados experimentales. De igual forma, hay medios específicos formulados para respaldar el cultivo de microorganismos in vitro. Los medios de cultivo proporcionan una fuente de energía para el crecimiento celular y compuestos que regulan los procesos celulares. Los cultivos de células procariotas y eucariotas pueden tener requisitos de crecimiento específicos. La selección de los medios depende del tipo de cultivo, el propósito del cultivo y los requisitos de densidad celular.
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Preparación de los medios
Los medios de cultivo comercializados se suministran en forma deshidratada o en polvo, en concentrado líquido o como disoluciones de trabajo. Los medios deshidratados para caldos de cultivo tienen que prepararse disolviéndolos en agua destilada y ajustando el pH final antes de la esterilización. Los medios en polvo para cultivos en agar deben disolverse en agua destilada, agitarse y luego hervirse o esterilizarse en autoclave antes de verterlos en placas de Petri estériles utilizando técnicas asépticas. Los medios de cultivo suministrados como concentrados líquidos deben diluirse de manera aséptica en agua destilada, ajustarse el pH y dispensarse en recipientes estériles para su conservación. Los medios de cultivo suministrados como disoluciones de trabajo están listos para su uso después de añadir el suero requerido u otros suplementos mediante filtración esterilizantes o en condiciones asépticas, y calentando a la temperatura apropiada para el crecimiento celular.
Esterilización de los medios de cultivo
Los medios de cultivo preparados a partir de polvo deben esterilizarse mediante filtración, calentamiento o en autoclave antes de utilizarse. Los medios líquidos suelen suministrarse estériles y a una concentración lista para usar, pero se recomienda esterilización mediante filtración, en particular si hay que añadir antes de usarlos sueros u otros suplementos. Después de la esterilización, deben utilizarse técnicas asépticas cuando se manipulen los medios de cultivo para evitar contaminación cruzada o el crecimiento de microorganismos no deseados.
Suplementos para medios de cultivo
Ciertos suplementos requeridos para cultivo o regulación celulares son inestables o termolábiles; por consiguiente, antes de utilizarlos, el usuario debe añadirlos a medios de cultivo basales esterilizados por calor. El suero procedente de fuentes bovinas (FBS) es un suplemento común utilizado en los medios de cultivo de células animales. Pueden necesitarse hormonas, factores de crecimiento y moléculas de comunicación específicas para el crecimiento de ciertos tipos de células. Para inducir la expresión de proteínas se utilizan aditivos como el IPTG. También pueden añadirse anticuerpos a los medios de cultivo para controlar el crecimiento de contaminantes bacterianos y fúngicos, aunque la contaminación puede controlarse bien con la manipulación y la conservación adecuada de los medios.
Almacenamiento y uso de los medios de cultivo
Los medios de cultivo comercializados y preparados en forma líquida, vertidos en forma de agar o en disoluciones de trabajo suelen conservarse a 4 °C en oscuridad para suprimir el crecimiento de microorganismos oportunistas y evitar la degradación de los componentes del medio de cultivo inducida por la luz. Antes de la inoculación, los medios deben calentarse a una temperatura apropiada para el crecimiento celular.
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