Zellisolierungskits

Obwohl die Untersuchung von Zellen, die aus In-vivo-Gewebe stammen, über die beste Vorhersagekraft für die Zellbiologie und -funktion verfügt, kann die biologische Komplexität die Ergebnisse beeinträchtigen, wenn die Zielzellpopulationen nicht isoliert werden. Zur Untersuchung von Zellphänotypen haben sich verschiedene Methoden zur Isolierung von Zellpopulationen auf der Grundlage definierter Merkmale entwickelt. Die Isolierung von Zellpopulationen dient nicht nur der biologischen Forschung, sondern erleichtert auch klinische Diagnosetests. Die wirksamsten Isolierungsmethoden weisen eine höhere Ausbeute, Reinheit und Viabilität auf. Die Anreicherung oder Aufreinigung von Zielpopulationen kann durch Positivselektion - oft unter Verwendung von Antikörpern, die zellspezifische Marker binden - oder durch Negativselektion erreicht werden, bei der biophysikalische Eigenschaften genutzt werden können, um unerwünschte Zellen zu entfernen und damit die Zielpopulation anzureichern.

Die Fraktionierung von Zellen in ihre subzellulären Bestandteile ist seit langem von grundlegender Bedeutung für zellbiologische Studien. Subzelluläre Fraktionierungstechniken sind weit verbreitet, um die Struktur und Funktion von Organellen und subzellulären Kompartimenten zu untersuchen und die Lage, Verarbeitung und den Transport von Biomolekülen zu verstehen. Das Ziel der meisten Fraktionierungstechniken ist es, Organellen und zelluläre Makromoleküle in einem funktionellen Zustand zu erhalten, in dem sie ihre intrinsischen biochemischen Eigenschaften behalten. Dies wird häufig durch eine Zelllyse mit sanften mechanischen Mitteln oder mit milden Detergenzien erreicht, in vielen Fällen gefolgt von einer Fraktionierung der Zellbestandteile durch Differenzialzentrifugation.

Isolierung von Zellen nach Phänotyp

Präadipozyten können zur Untersuchung des Prozesses der Adipogenese und nach der Differenzierung zur Bewertung der Lipolyse, der zellulären Signaltransduktion, der endokrinen Funktion und der Stoffwechselaktivität verwendet werden.

In unserem Kit zur Isolierung von Präadipozyten sind die Werkzeuge und Reagenzien kombiniert, die zur Isolierung der stromalen vaskulären Zellfraktion aus Fettgewebe benötigt werden. Die so entstandene stromale vaskuläre Fraktion wird auf einer Gewebekulturplatte kultiviert, an der Präadipozyten anhaften. Die Präadipozyten behalten die Fähigkeit, sich zu vermehren und in Adipozyten zu differenzieren, wenn sie mit differenzierungsfördernden Komponenten behandelt werden.

Isolierung von Organellen und subzellulären Komplexen

Die Ableitung subzellulärer Komponenten fördert das Verständnis der Organellenfunktion und kann zu neuen Biotechnologien führen. So können beispielsweise aus Säugerzellen isolierte Zellkerne anschließend für die Synthese endogener RNA-Primärtranskripte verwendet werden. Das Nuclei EZ Prep Kit (NUC101, NUC201) mit hoher Ausbeute wurde für die schnelle Isolierung von Zellkernen aus den meisten Säugerzellen entwickelt.

Zum Nachweis der mitochondrialen Integrität und des Membranpotenzials wird in unserem Mitochondrien-Färbekit (CS0390, CS0760) der Farbstoff JC-1 (420200, T4069) verwendet, der sich in der mitochondrialen Matrix anreichert und rot fluoreszierende Aggregate bildet. Ereignisse wie die Apoptose, durch die das mitochondriale Membranpotenzial abgebaut wird, verhindern die Anreicherung des JC-1-Farbstoffs in den Mitochondrien, sodass ein Fluoreszenzmikroskop verwendet werden kann, um lebensfähige von geschädigten Mitochondrien zu unterscheiden.

Subzelluläre Komplexe wie Proteasomen, die keine Organellen sind, können ebenfalls zur Verwendung in proteolytischen Assays isoliert werden. Bei unserer Methode werden Affinitätsmatrix-Beads verwendet, die ein GST-Fusionsprotein mit einer Ubiquitin-ähnlichen Domäne enthalten, die an GST-Agarose gebunden ist.

Anreicherung des Zytoskeletts

Die Arbeit mit den Proteinen, die mit dem Aktin-Zytoskelett assoziiert sind, war bisher eine Herausforderung, da die Elemente des Zytoskeletts in Detergenzien wie Triton X-100 unlöslich sind. Das Millipore ProteoExtract^® Kit zur Anreicherung und Isolation des Zytoskeletts bietet Zytoskelett-Aufreinigungspuffer, die fokale Adhäsions- und Aktin-assoziierte Proteine zurückhalten, während lösliche zytoplasmatische und nukleäre Proteine aus der Zelle entfernt werden. Mit diesem Ansatz wird die Fähigkeit verbessert, gering abundante Aktin-assoziierte Proteine zu erkennen und zu untersuchen, die bei Western-Blotting-Methoden für die Analyse von Ganzzell-Lysaten oft überdeckt werden.