ECAS9GFPPR

eSpCas9-GFP-Protein

from Streptococcus pyogenes with mutations conferring enhanced specificity, fused with enhanced GFP, recombinant, expressed in E. coli, 3X NLS

• Synonym(e): eSpCas9-EGFP, eSpCas9-GFP
• UNSPSC-Code: 12352202
• NACRES: NA.51

Eigenschaften

• Rekombinant: expressed in E. coli
• Assay: ≥90% (SDS-PAGE)
• Form: lyophilized powder
• Verpackung: pkg of 1 kit (3 components)
• Reportergen: GFP
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Rekombinantes Cas9-GFP-Protein mit verbesserter Spezifität aus Streptococcus pyogenes (~192 kD) ist ein gebrauchsfertiges Reagenz für Genome-Engineering-Experimente. In Kombination mit zielspezifischer Guide-RNA agiert eSpCas9-GFP-Protein als eine gerichtete Nuklease, die sich für die Transfektion von Zellkulturen und die beschleunigte Entwicklung von genetisch modifizierten Tieren mittels Injektion eines einzelligen Embryos eignet.

Ein am N-Terminus kondensiertes, verbessertes, grün fluoreszierendes Protein mit einem Anregungspeak bei 488 nm und Emissionspeak bei 509 nm ermöglicht die Visualisierung von transfiziertem RNP-Komplex zusätzlich zu dem Nutzen in Durchflusszytometrieanwendungen.  Das Protein enthält außerdem drei verschiedene nukleare Lokalisierungssequenzen, die für optimale Aktivität positioniert sind.

Anwendung

• Funktionelle Genomik
• Targetvalidierung
• Genome Editing
• Fluoreszenzmikroskopie
• Durchflusszytometrie

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Verbesserte Spezifizität im Vergleich zu Wildtyp-Cas9
• Hochaktiv
• Bereit zur Injektion/Transfektion

Verpackung

Pkg. zu 50 μg (≥ 260 pmol)
Pkg. mit 250 μg (≥ 1300 pmol)

Komponenten

Jedes Kit umfasst:

• ein Fläschchen mit lyophilisiertem rekombinanten eSpCas9-GFP-Protein
• ein Fläschchen mit 1 ml 1x Verdünnungspuffer
• ein Fläschchen mit 1 ml nukleasefreiem Wasser mit Glycerin

Prinzip

CRISPR/Cas-Systeme werden von Bakterien und Archaeen als Schutz vor angreifenden Viren und Plasmiden eingesetzt. Kürzlich wurde das CRISPR/Cas-System Typ II aus dem Bakterium Streptococcus pyogenes genetisch modifiziert, um in eukaryotischen Systemen unter Verwendung von zwei molekularen Komponenten zu funktionieren: ein einzelnes Cas9-Protein und eine nichtcodierende Guide-RNA (gRNA). Die Cas9-Endonuklease kann mit einer einzelnen gRNA, die einen DNA-Doppelstrangbruch (DSB) an einer gewünschten Genomstelle steuert, programmiert werden. Ähnlich wie bei DBS, die durch Zinkfingernukleasen (ZFN) ausgelöst werden, aktiviert die Zelle anschließend den DNA-Reparaturprozess, entweder Non-homologous end-joining (NHEJ) oder homologe Reparatur, um den entsprechenden DSB zu heilen.

Neu entwickeltes eSpCas9 (1.1) ermöglicht die effiziente Manipulation des Zielgens mit etablierten CRISPR-Systemen und weist den Vorteil verringerter Off-Target-Effekte auf. Punktmutationen (K848A/K1003A/R1060A) im chromosombindenden Motiv von SpCas9, wie von Slaymaker, et al. beschrieben, bieten eine höhere On-Target-Genauigkeit ohne Verlust der Spaltungswirkung.

Rekonstituierung

Lyophilisiertes S. pyogenes eSpCas9-GFP-Protein mit verbesserter Spezifität sollte erneut in der Rekonstitutionslösung suspendiert werden, um die gewünschte Konzentration bereitzustellen. Tippen Sie sanft gegen das Röhrchen, um das lyophilisierte Pulver vollständig zu lösen, anschließend 10 Minuten auf Eis inkubieren und das Röhrchen schleudern, um das Material an den Boden des Röhrchens zu bringen.

Sonstige Hinweise

Verwenden Sie unser CRISPR Selection Tool, um gRNA zu bestellen

Sehen Sie sich unsere anderen MISSION^® Cas9-Proteine an: SigmaAldrich.com/CRISPRproteins

Rechtliche Hinweise

CRISPR-Nutzungslizenzvereinbarung

MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids