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In Situ Cell Death Detection Kit, Fluorescein

sufficient for ≤50 tests, suitable for detection

• Synonym(e): Fluoreszein-12-UTP, Tetralithiumsalz, Fluoreszein-5(6)-carboxamidocaproyl-(5-[3-aminoallyl]uridin-5′-triphosphat)
• UNSPSC-Code: 12352200

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for ≤50 tests
• Qualitätsniveau: 100
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): flow cytometry: suitable
• Anwendung(en): detection
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Kit zum Nachweis und zur Quantifizierung der Apoptose auf der Ebene der einzelnen Zellen durch die Markierung von DNA-Strangbrüchen (TUNEL-Technologie); Analyse mit Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie.

Zu den häufig angewendeten Methoden zur Apoptosebestimmung gehört die Analyse der genomischen DNA durch Agarose-Gelelektrophorese sowie DNA-Fragmentierungsassays, basierend auf ³H-Thymidin oder auf 5-Brom-2′-desoxyuridin. Diese Methoden bestehen darin, dass in einer gegebenen Zellpopulation die fragmentierten DNA, die ein geringeres Molekulargewicht aufweisen, von den nicht fragmentierten DNA, deren Molekulargewicht höher ist, getrennt werden. Somit liefern diese Methoden keine Informationen darüber, was mit einer Einzelzelle innerhalb einer Population oder insbesondere in Gewebeschnitten geschieht. Alternativ können einzelne apoptotische Zellen - aufgrund des charakteristischen Erscheinungsbildes der Chromatinkondensierung und -fragmentierung in ihren Kernen - mikroskopisch festgestellt werden. Diese Methode ist allerdings subjektiv und kann nur innerhalb eines relativ kurzen Zeitraums genutzt werden, wenn die morphologischen Veränderungen ihren Höhepunkt erreichen.
Die Apoptose ist durch den DNA-Abbau gekennzeichnet, der in Frühstadien selektiv an den internukleosomalen DNA-Linker-Regionen stattfindet. Aus der DNA-Spaltung können Doppel- und Einzelstrangbrüche der DNA (Nicks) entstehen. Beide Arten von Brüchen können durch die Markierung der freien 3′-OH-Termini mit modifizierten Nukleotiden (z.B. Biotin-dUTP, DIG-dUTP, Fluorescein-dUTP) in einer enzymatischen Reaktion nachgewiesen werden. Das Enzym Terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) katalysiert die Template-unabhängige Polymerisation von Desoxyribonukleotiden an das 3′-Ende der einzel- oder doppelsträngigen DNA. Diese Methode wird auch als TUNEL-Methode (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling) bezeichnet. Alternativ können freie 3′-OH-Gruppen durch DNA-Polymerasen im Zuge eines Template-abhängigen Prozesses, der sog. Nick-Translation, markiert werden. Die TUNEL-Methode gilt allerdings als die genauere und schnellere Methode.

Spezifität

Mit der TUNEL-Reaktion werden vor allem DNA-Strangbrüche markiert, die während der Apoptose erzeugt werden. Dies ermöglicht die Unterscheidung zwischen Apoptose und Nekrose sowie primären DNA-Strangbrüchen, die durch Zytostatika oder Bestrahlung induziert wurden.

Anwendung

Das In Situ Cell Death Detection Kit, Fluorescein, bietet ein präzises, schnelles und einfaches nicht-radioaktives Verfahren zum Nachweis und zur Quantifizierung des Zelltods durch Apoptose auf der Ebene einzelner Zellen durch Fluoreszenzmikroskopie und quantitativem Nachweis mit Durchflusszytometrie in Zellen und Geweben. Aus diesem Grund kann das In Situ Cell Death Detection Kit für viele verschiedene Assay-Systeme eingesetzt werden.
Zum Beispiel:

• Nachweis von einzelnen apoptotischen Zellen in gefrorenen und Formalin-fixierten Gewebeschnitten in der Grundlagenforschung
• Bestimmung der Sensitivität maligner Zellen gegenüber medikamenteninduzierter Apoptose in der Krebsforschung
• Typisierung von Zellen, die den Zelltod durchlaufen, in heterogenen Populationen durch Doppelfärbung

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Sensitiv: Die direkte Markierung mit Fluorescein-dUTP verringert die Hintergrundfärbung
• Schnell: Durch die Verwendung von Fluorescein-dUTP können die Proben direkt nach der TUNEL-Reaktion analysiert werden
• Praktisch: Es ist kein zweites Detektionssystem erforderlich
• Genau: Apoptose wird auf molekularer Ebene (DNA-Strangbrüche) identifiziert und Zellen in sehr frühen Apoptosestadien erkannt

Verpackung

1 Kit mit 2 Komponenten.

Angaben zur Herstellung

Arbeitslösung: Das Gesamtvolumen (50 μl) der Enzymlösung zu den verbleibenden 450 μl der Markierungslösung hinzufügen; dies ergibt 500 μl TUNEL-Reaktionsgemisch.
Gut mischen, um die Komponenten zu äquilibrieren.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• Enzyme Solution (TdT)
• Label Solution (fluorescein-dUTP)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS09
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H350i - H411
• P-Sätze: P201 - P273 - P280 - P308 + P313 - P391 - P501
• Gefahreneinstufungen: Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
• Lagerklassenschlüssel: 6.1D - Non-combustible, acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash