IMM001
Mastzelldegranulations-Assay-Kit
The Mast Cell Degranulation Assay Kit provides a quick, efficient & sensitive system for evaluation of tryptase activity in culture supernatants, cell lysates or other tryptase-containing samples.
Synonym(e):
Live mast cell tryptase assay
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About This Item
UNSPSC-Code:
12352207
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.32
Empfohlene Produkte
Hersteller/Markenname
Chemicon®
Methode(n)
activity assay: suitable
cell based assay: suitable
Versandbedingung
dry ice
Allgemeine Beschreibung
Einleitung
Degranulation, die Sekretion zytoplasmatischer Granula, ist ein äußerst wichtiger Schritt in der Entzündungsreaktion von Leukozyten (z. B. Basophile, Neutrophile, Eosinophile und Mastzellen). Außer Histamin enthalten diese Sekretgranula viele entzündungsfördernde Mediatoren wie Heparin, Zytokine, Chemokine und viele Proteasen (Hallgren, 2001). Tryptase, eine tetramere Serinprotease, hat sich als Hauptkomponente von Mastzellgranula profiliert und umfasst bis zu 20 % des Gesamtproteins von aus Lungen-, Darm- und Hautgewebe gewonnenen Mastzellen (He, 2004; He, 1998; Schwartz, 1986). Tryptase ist ein bevorzugter Indikator für die Aktivierung von Mastzellen und ein Ziel der therapeutischen Behandlung von allergischen Erkrankungen, da es fast ausschließlich in Mastzellen gespeichert wird. Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon ist ein schnelles, effizientes und empfindliches System zur Bewertung der Tryptase-Aktivität in Zelllysaten und Kulturüberständen sowie zum Screening von Hemmstoffen.
Testprinzip
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon bietet eine einfache und praktische Methode zur Prüfung der Tryptase-Aktivität. Der Assay basiert auf dem spektrophotometrischen Nachweis des Chromophors p-Nitroanilin (pNA) nach Spaltung vom markierten Substrat Tosyl-Gly-Pro-Lys-pNA. Das freie pNA kann dann mit einem Spektrophotometer oder einem Mikrotiterplatten-Lesegerät bei 405 nm quantifiziert werden. Als Vergleichskontrollprobe wird ein pNA-Standard zur Verfügung gestellt.
Zur Induktion der Degranulation von Proben ist Calciumionophor A23187 (Calcimycin) im Kit enthalten. Calcimycin ist ein umfassend dokumentierter Induktor der Freisetzung von Tryptase aus humanen Mastzellen (2,3).
Für Screeningzwecke ist ein Tryptasehemmer (Protamin) als Testinhibitor beigefügt. Protamin ist ein leistungsstarker Antagonist von Heparin, der Heparin, ein wichtiger stabilisierender Faktor der Mastzelltryptase, kompetitiv bindet (Hallgren, 2001; Schwartz, 1986). Berichten zufolge hemmt Protamin sowohl humane als auch murine Tryptase (Hallgren, 2001). Der im Kit enthaltene Assaypuffer enthält Heparin zur Stabilisierung von Tryptase.
Degranulation, die Sekretion zytoplasmatischer Granula, ist ein äußerst wichtiger Schritt in der Entzündungsreaktion von Leukozyten (z. B. Basophile, Neutrophile, Eosinophile und Mastzellen). Außer Histamin enthalten diese Sekretgranula viele entzündungsfördernde Mediatoren wie Heparin, Zytokine, Chemokine und viele Proteasen (Hallgren, 2001). Tryptase, eine tetramere Serinprotease, hat sich als Hauptkomponente von Mastzellgranula profiliert und umfasst bis zu 20 % des Gesamtproteins von aus Lungen-, Darm- und Hautgewebe gewonnenen Mastzellen (He, 2004; He, 1998; Schwartz, 1986). Tryptase ist ein bevorzugter Indikator für die Aktivierung von Mastzellen und ein Ziel der therapeutischen Behandlung von allergischen Erkrankungen, da es fast ausschließlich in Mastzellen gespeichert wird. Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon ist ein schnelles, effizientes und empfindliches System zur Bewertung der Tryptase-Aktivität in Zelllysaten und Kulturüberständen sowie zum Screening von Hemmstoffen.
Testprinzip
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon bietet eine einfache und praktische Methode zur Prüfung der Tryptase-Aktivität. Der Assay basiert auf dem spektrophotometrischen Nachweis des Chromophors p-Nitroanilin (pNA) nach Spaltung vom markierten Substrat Tosyl-Gly-Pro-Lys-pNA. Das freie pNA kann dann mit einem Spektrophotometer oder einem Mikrotiterplatten-Lesegerät bei 405 nm quantifiziert werden. Als Vergleichskontrollprobe wird ein pNA-Standard zur Verfügung gestellt.
Zur Induktion der Degranulation von Proben ist Calciumionophor A23187 (Calcimycin) im Kit enthalten. Calcimycin ist ein umfassend dokumentierter Induktor der Freisetzung von Tryptase aus humanen Mastzellen (2,3).
Für Screeningzwecke ist ein Tryptasehemmer (Protamin) als Testinhibitor beigefügt. Protamin ist ein leistungsstarker Antagonist von Heparin, der Heparin, ein wichtiger stabilisierender Faktor der Mastzelltryptase, kompetitiv bindet (Hallgren, 2001; Schwartz, 1986). Berichten zufolge hemmt Protamin sowohl humane als auch murine Tryptase (Hallgren, 2001). Der im Kit enthaltene Assaypuffer enthält Heparin zur Stabilisierung von Tryptase.
Anwendung
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit ist ein schnelles, effizientes und empfindliches System zur Bewertung der Tryptase-Aktivität in Kulturüberständen, Zelllysaten und anderen Tryptase-haltigen Proben.
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit ist ein schnelles, effizientes und empfindliches System zur Bewertung der Tryptase-Aktivität in Kulturüberständen, Zelllysaten und anderen Tryptase-haltigen Proben. Dieser Assay ermöglicht außerdem die Prüfung aufgereinigter Tryptase-Enzyme, das Screening von In-vitro-Hemmstoffen und die Untersuchung der Zelldegranulation.
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon ist nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für diagnostische oder therapeutische Anwendungen zu verwenden.
Das Mastzelldegranulations-Assay-Kit von Chemicon ist nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für diagnostische oder therapeutische Anwendungen zu verwenden.
Komponenten
Tryptase-Positivkontrolle (Artikel-Nr. 2003650): 20 μL 0,1-mg/mL-Lösung.
5x Assaypuffer (Artikel-Nr. 2003649): 20 mL mit 0,1 % Heparin.
Calciumionophor A23187 (Artikel-Nr. 2003652): 100 μL 1 mM in DMSO.
Tryptase-Inhibitor (Protamin) (Artikel-Nr. 2003651): 250 μL 10-mM-Lösung.
Tryptase-Substrat (Tosyl-Gly-Pro-Lys-pNA) (Artikel-Nr. 90569): 3,125 mg.
pNA-Standard (Artikel-Nr. 90085): 250 μL 10 mM in DMSO.
5x Assaypuffer (Artikel-Nr. 2003649): 20 mL mit 0,1 % Heparin.
Calciumionophor A23187 (Artikel-Nr. 2003652): 100 μL 1 mM in DMSO.
Tryptase-Inhibitor (Protamin) (Artikel-Nr. 2003651): 250 μL 10-mM-Lösung.
Tryptase-Substrat (Tosyl-Gly-Pro-Lys-pNA) (Artikel-Nr. 90569): 3,125 mg.
pNA-Standard (Artikel-Nr. 90085): 250 μL 10 mM in DMSO.
Lagerung und Haltbarkeit
Die Kit-Materialien (wie geliefert) bis zu ihrem Verfallsdatum bei -20 °C aufbewahren. Hinweise zur Lagerung spezifischer Komponenten finden Sie im Kapitel „Aufbewahrung von Reagenzien“.
Aufbewahrung von Reagenzien
1. Tryptase-Positivkontrolle: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
2. 5x Assaypuffer: Den 5x Assaypuffer mit entionisiertem Wasser verdünnen. Rühren, bis die Lösung homogen ist, und bis zum Verfallsdatum bei 2–8 °C aufbewahren.
3. Calciumionophor A23187: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
4. Tryptase-Inhibitor: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
5. Tryptase-Substrat: Mit 2 mL 1x Assaypuffer (2,5 mM Stammlösung) rekonstituieren. Aliquotieren und bis zu 3 Monate bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
6. pNA-Standard: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
Hinweis: Positivkontrolle, Substrat, pNA-Standard und Calciumionophor sind lichtempfindlich; Braunglasfläschchen oder gleichartige Gefäße verwenden. Bei Handhabung und Lagerung so weit wie möglich vor Licht schützen.
Aufbewahrung von Reagenzien
1. Tryptase-Positivkontrolle: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
2. 5x Assaypuffer: Den 5x Assaypuffer mit entionisiertem Wasser verdünnen. Rühren, bis die Lösung homogen ist, und bis zum Verfallsdatum bei 2–8 °C aufbewahren.
3. Calciumionophor A23187: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
4. Tryptase-Inhibitor: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
5. Tryptase-Substrat: Mit 2 mL 1x Assaypuffer (2,5 mM Stammlösung) rekonstituieren. Aliquotieren und bis zu 3 Monate bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
6. pNA-Standard: Fläschchen bei 2–8 °C auftauen. Aliquotieren und bis zum Verfallsdatum des Fläschchens bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen vermeiden.
Hinweis: Positivkontrolle, Substrat, pNA-Standard und Calciumionophor sind lichtempfindlich; Braunglasfläschchen oder gleichartige Gefäße verwenden. Bei Handhabung und Lagerung so weit wie möglich vor Licht schützen.
Rechtliche Hinweise
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Haftungsausschluss
Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.
Lagerklassenschlüssel
10 - Combustible liquids
Analysenzertifikate (COA)
Suchen Sie nach Analysenzertifikate (COA), indem Sie die Lot-/Chargennummer des Produkts eingeben. Lot- und Chargennummern sind auf dem Produktetikett hinter den Wörtern ‘Lot’ oder ‘Batch’ (Lot oder Charge) zu finden.
Besitzen Sie dieses Produkt bereits?
In der Dokumentenbibliothek finden Sie die Dokumentation zu den Produkten, die Sie kürzlich erworben haben.
Tsong-Min Chang et al.
Molecules (Basel, Switzerland), 26(13) (2021-07-03)
Mast cells play a crucial role in the pathogenesis of type 1 allergic reactions by binding to IgE and allergen complexes and initiating the degranulation process, releasing pro-inflammatory mediators. Recently, research has focused on finding a stable and effective anti-allergy
Simon Gebremeskel et al.
Frontiers in immunology, 12, 650331-650331 (2021-03-30)
Coronavirus disease 2019 (COVID-19) caused by SARS-CoV-2 infection represents a global health crisis. Immune cell activation via pattern recognition receptors has been implicated as a driver of the hyperinflammatory response seen in COVID-19. However, our understanding of the specific immune
Shaun A Summers et al.
Journal of the American Society of Nephrology : JASN, 22(12), 2226-2236 (2011-10-25)
Leukocyte recruitment contributes to acute kidney injury (AKI), but the mechanisms by which leukocytes promote injury are not completely understood. The degranulation of mast cells releases inflammatory molecules, including TNF, but whether these cells participate in the pathogenesis of AKI
IgE-mediated mast cell activation promotes inflammation and cartilage destruction in osteoarthritis.
Qian Wang et al.
eLife, 8 (2019-05-16)
Osteoarthritis is characterized by articular cartilage breakdown, and emerging evidence suggests that dysregulated innate immunity is likely involved. Here, we performed proteomic, transcriptomic, and electron microscopic analyses to demonstrate that mast cells are aberrantly activated in human and murine osteoarthritic
Katja Zschiebsch et al.
Journal of cellular and molecular medicine, 23(2), 985-1000 (2018-11-20)
GTP cyclohydrolase (GCH1) governs de novo synthesis of the enzyme cofactor, tetrahydrobiopterin (BH4), which is essential for biogenic amine production, bioactive lipid metabolism and redox coupling of nitric oxide synthases. Overproduction of BH4 via upregulation of GCH1 in sensory neurons
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