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EZ-Magna NuCLEAR^™ RIP (vernetzt) Zellkern-RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationskit

EZ-Magna Nuclear RIP (Cross-Linked) RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit is designed for the analysis of chromatin associated RNA such lncRNAs, enhancer RNAs and miRNAs.

• Synonym(e): Magnetic RNA-BP Immunoprecipitation, RNA-Binding Protein Immunoprecipitation
• UNSPSC-Code: 12161503
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.32

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Hersteller/Markenname: Magna Nuclear RIP
• Methode(n): RIP: suitable; activity assay: suitable (protein interaction); immunoprecipitation (IP): suitable
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Eigenschaften und Vorteile

• Erzeugt vernetztes Chromatin, um die Analyse einer Reihe von Chromatin-assoziierten RNA zu ermöglichen
• Flexible, skalierbare Eingabeanforderungen: RNA-Gewinnung aus Millionen von Zellen oder so wenigen wie nur 5000 Zellen
• Gemisch aus magnetischen Protein-A/G-Beads, das für Puffersysteme optimiert wurde, was zu geringen Hintergründen und hohen Signal-Rausch-Verhältnissen führt
• Geeignet für Analysen mittels RT-qPCR oder RIP-seq
• Vollständiges Set aus Reagenzien und detailliertes Protokoll für einen erfolgreichen ersten Versuch

Magna Nuclear RIP-Kits wurden speziell für die Entdeckung und Analyse von verschiedenen Chromatin-assoziierten RNA wie lange nichtkodierende RNA, Verstärker-RNA und miRNA entwickelt. Diese Chromatin-assoziierten RNA regulieren häufig die Genexpression und können mit Anwendungen wie quantitative Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR), Microarray-Analyse (RIP-Chip) und Next-Generation-Sequencing (RIP-seq) analysiert werden.

Nuclear RIP kann mit Chromatin, dessen Wechselwirkungen durch eine Formaldehydbehandlung (vernetzt) stabilisiert werden, oder Chromatin, das nicht mit einem Vernetzungsmittel behandelt wurde (nativ), durchgeführt werden. Obwohl beide Ansätze dahingehend ähnlich sind, dass sie entwickelt wurden, um Chromatin-assoziierte RNA zu gewinnen, unterscheiden sich die eingesetzten Reagenzien und Details des Protokolls sowie die Art der nachgewiesenen Wechselwirkungen in der Regel. In vernetzter Form können Komplexe mit höherer Molekülmasse in In-vivo-Konfigurationen mit möglicherweise geringeren Affinitäten eingefangen werden. Im Gegensatz dazu wird erwartet, dass natives RIP höhere Affinität und direktere Wechselwirkungen zwischen durch Protein kodierte RNA-Bindungsmotiven und Kandidaten-RNA gewinnt. Für weniger gut verstandene Proteine und Proteinkomplexe werden oft beide Herangehensweisen eingesetzt.

Das hier beschriebene Kit ist für den vernetzten Ansatz vorgesehen. Falls ein nativer Ansatz für Sie interessant ist, besuchen Sie die Produktseite für das Magna Nuclear RIP (nativ) Kit, Katalognr. 17-10522 oder für das EZ-Magna Nuclear RIP (nativ) Kit, Katalognr. 17-10523.

Verpackung

Kit-Kapazität: 24 RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitationsassays mit einem vernetzten Zellkernlysat

Komponenten

10 X Glycin

10 X PBS

Zellkernisolationspuffer

RIP-vernetzter Lysepuffer

magnetische Protein-A/G-Beads

Zellkern-RIP-Verdünnungspuffer

Waschpuffer mit geringem Salzgehalt

Waschpuffer mit hohem Salzgehalt

LiCl-Waschpuffer

TE-Puffer

RIP-Elutionspuffer

10 % SDS

0,5 mol/l EDTA

DNase I (RNase-frei)

DNase I-Ergänzung

DNase I-Reaktionspuffer

Proteaseinhibitor-Cocktail III, tierfrei

RNAse-Inhibitor

Proteinase K


Kontrollantikörper und -primer
Normales Maus-IgG als Negativkontrolle-Antikörper

Anti-EZH2-Antikörper als Positivkontrolle

NEAT1 als positive Kontrollprimer

U1-snRNA als negative Kontrollprimer

Physikalische Form

Zwei Packungen mit Schlüsselreagenzien zum Erzeugen von vernetzten Zellkernlysaten und Durchführen von 24 einzelnen RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitations(RIP)-Reaktionen. Zusätzlich eine Packung mit Positiv- und Negativkontrolle-Antikörpern und qPCR-Primern.

Lagerung und Haltbarkeit

Komponenten nach Erhalt bei den auf den Etiketten angegebenen Temperaturen aufbewahren.
Bei Lagerung nach Anweisung sind die Kit-Komponenten ab Versanddatum 6 Monate stabil.

Rechtliche Hinweise

NuCLEAR is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS05,GHS07
• Signalwort: Danger
• P-Sätze: P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338 - P313
• Lagerklassenschlüssel: 10-13 - German Storage Class 10 to 13