04-808

Anti-Dimethyl-Histon-H3-(Arg2-)Antikörper, Klon 20.2, Kaninchen monoklonal

culture supernatant, clone 20.2, Upstate^®

• Synonym(e): H3R2me2, Histone H3 (di methyl R2)
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: culture supernatant
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: 20.2, monoclonal
• Speziesreaktivität: human, vertebrates
• Hersteller/Markenname: Upstate^®
• Methode(n): dot blot: suitable; inhibition assay: suitable (peptide); multiplexing: suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_003493
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q16695
• Versandbedingung: dry ice
• Posttranslationale Modifikation Target: dimethylation (Arg2)
• Angaben zum Gen: human ... H3C1(8350)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Histone sind hochkonservierte Proteine und dienen bei der Organisation von Zellkern-DNA zu Chromatin als Strukturgerüst. Die vier Haupt-Histone, H2A, H2B, H3 und H4, bilden ein Oktamer (jeweils 2 Moleküle). Anschließend werden 146 DNA-Basenpaare um das Oktamer gewickelt und bilden ein Nukleosom, die grundlegende Untereinheit von Chromatin. Histone werden posttranslational durch die Wirkung von Enzymen sowohl im Zellkern als auch im Zytoplasma modifiziert. Die am häufigsten untersuchten Modifikationen sind Acetylierung, Phosphorylierung, Methylierung und Ubiquitinylierung. Diese Modifikationen können die lokale Chromatinarchitektur verändern oder trans-agierende Faktoren rekrutieren, die spezifische Histon-Modifikationen erkennen (die „Histon-Code“-Hypothese). Diese Modifikationen treten überwiegend an N-terminalen und C-terminalen Enden auf, die sich über das Nukleosom-Kernteilchen hinaus erstrecken. Die Histon-H3-Arg2-Methylierung ist eine weit verbreitete Silencing-Modifikation, die die Histon-H3-Lys4-Trimethylierung hemmt.

Spezifität

Die Immunisierungssequenz ist evolutionär stark konserviert, sodass eine breite Kreuzreaktivität erwartet wird.

Erkennt Dimethylarginin an Rest 2 von Histon H3, Mr 17kDa. In einigen Proben werden weitere, nicht identifizierte Banden über 50 kDa nachgewiesen.

Immunogen

Epitop: Arg2 von Histon H3

KLH-konjugiertes, synthetisches Peptid, das die Sequenz …Ame2RTKQ… enthält, wobei me2R dem Dimethyl-Arginin-2 von humanem Histon H3 entspricht.

Anwendung

Der Anti-Dimethyl-Histon-H3-(Arg2-)Antikörper, Klon 20.2 (monoklonaler Kaninchen-Antikörper), ist zur Verwendung in DB, Mplex, PIA und WB für den Nachweis von Dimethyl-Histon-H3 (Arg2), auch bekannt als H3R2me2, Histon H3 (Dimethyl R2), validiert.

Dot-Blot-Analyse: AbSurance Histon-H3-Antikörperspezifitäts-Array (Art.-Nr. 16-667) und AbSurance Histon-H2A-, H2B-, H4-Antikörperspezifitäts-Array (Art.-Nr. 16-665), die Histon-Peptide mit verschiedenen Modifikationen enthalten, wurden mit Art.-Nr. 04-808, Anti-Dimethyl-Histon-H3 (Arg2) bei 1 ug/ml (1:1000-Verdünnung) untersucht. Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Kaninchen-IgG vom Esel und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert.

Analyse der Peptidhemmung:
2 μM Histon-H3-Peptid, das Dimethyl-Arg2 enthält, hebt den Nachweis von Histon H3 durch eine frühere Charge von Anti-Dimethyl-Histon-H3(Arg2) (1:4.000 Verdünnung) in Immunblots von HeLa-Säureextrakten auf. Es gab auch eine gewisse Signalkonkurrenz mit dem unveränderten Arg2-enthaltenden Peptid.

Peptid-Dot-Blot-Analyse:
Eine 1:4.000–1:16.000 Verdünnung einer früheren Charge wies nur Histon-H3-Peptid mit Dimethyl-Arg2 nach. Peptide mit unverändertem Arg2, Dimethyl-Arg17 oder Dimethyl-Arg26 wurden nicht nachgewiesen.

Beadlyte Histon-Peptid-Assay:
Verdünnungen von 1:500 bis 1:48.000 einer früheren Charge wiesen Histon-H3-Peptid mit Dimethyl-Arg2 nach. Es wurde keine Kreuzreaktivität mit Peptiden mit unmodifiziertem Arg2 oder Dimethyl-Arg17 oder -26 beobachtet.

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
Histone

Qualität

Regelmäßig mittels Immunblot an säureextrahierten Proteinen aus HeLa-Zellen beurteilt.

Immunblot-Analyse: Eine 1:500- (Bahn 1) und 1:1.000-Verdünnung (Bahn 2) dieser Charge wies methyliertes Histon H3 in säureextrahierten Proteinen von HeLa-Zellen nach.

Zielbeschreibung

17 kDa

Verlinkung

Ersetzt: 05–808

Physikalische Form

Kulturüberstand in 0,05 % Natriumazid

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.
Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach Empfang und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können.

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
HeLa-Zell-Säurenextrakte

Rechtliche Hinweise

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

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