Trasfezione & editing genetico
La trasfezione è il processo mediante il quale gli acidi nucleici vengono introdotti nelle cellule eucariotiche. Le cellule possono essere trasfettate stabilmente, quando si verifica l'integrazione del DNA nel genoma, oppure in modo transiente, per ottenere un'espressione di proteine di durata temporanea La trasfezione viene effettuata mediante metodi diversi, chimici, fisici o biologici e consente lo studio della funzione e dell'espressione genica in un sistema cellulare. Le applicazioni includono la terapia genica, la generazione di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC), il silenziamento genico mediante la tecnica della RNA interference (RNAi) e la produzione di anticorpi e proteine terapeutici.
Articoli tecnici correlati
- Transfection is the introduction of DNA, RNA, or proteins into eukaryotic cells and is used in research to study and modulate gene expression. Thus, transfection techniques and protocols serve as an analytical tool that facilitates the characterization of genetic functions, protein synthesis, cell growth and development.
- Browse our convenient transfection reagent selection guide to match the best reagent for your specific cell line and application needs.
- Automation is used for many applications to reduce variation caused by manual handling and to obtain reproducible results in high-throughput assays. High-throughput applications, such as knockdown studies or target screenings, often include cell transfection.
- Small inhibitory RNAs (siRNAs) have become the focus of interest in many laboratories. For the first time, these molecules offer an easy way to knock down the expression of selected genes in mammalian cells without having to resort to classical gene knockout techniques.
- This discussion will highlight some of these methodologies, namely, the use of Multiple Reaction Monitoring (MRM) and Protein-AQUA.
- Visualizza tutti (21)
Protocolli correlati
- Our Universal Transfection Reagent is a unique formulation of a proprietary polymer blend used for transient and stable transfection of nucleic acids into various eukaryotic cell lines and hard-to-transfect primary cells. This is a fast and easy protocol is compatible with serum, serum-free medium and antibiotics.
- Protocols for Transfecting Common Cell Lines with X-tremeGENE™ Transfection Reagents
- Cell preparation for transfection Plate cells approx. 24 hours before transfection making sure cells are at optimal concentration (70 – 90 % confluency).
- Calcium phosphate transfection is a common method for the introduction of DNA into eukaryotic cells. This protocol can be optimized for use with a wide variety of cell types.
- Product manual provides detailed protocol for easy DNA transfection.
- Visualizza tutto (22)
Metodi comuni di trasfezione
- Lipidi e liposomi: i lipidi cationici sono usati per produrre liposomi in cui viene inserito il DNA o l’RNA da rilasciare. Questi liposomi si fondono con la membrana cellulare e rilasciano gli acidi nucleici all’interno della cellula.
- Fosfato di calcio: il fosfato di calcio facilita il legame del DNA con la superficie cellulare, consentendo al materiale genetico di entrare nella cellula per endocitosi.
- Polimeri cationici: nella trasfezione basata su polimeri, il DNA esogeno forma complessi con dei polimeri cationici come la polietilenimmina (PEI) che entrano nella cellula ospite mediante endocitosi.
- Trasduzione lentivirale: le cellule vengono infettate con i vettori lentivirali modificati, questi retrotrascrivono il proprio RNA in DNA a doppia elica che viene quindi integrato nel genoma dell'ospite.
- Microiniezione: le cellule bersaglio vengono posizionate al microscopio. L'acido nucleico viene quindi iniettato direttamente nel citoplasma o nel nucleo utilizzando un sottile ago capillare di vetro.
- Elettroporazione: le cellule sono sottoposte ad una corrente elettrica ad alta intensità che destabilizza le membrane aumentandone la permeabilità e consentendo così l’ingresso del DNA.
La trasfezione viene abitualmente utilizzata in tecniche come l’editing genetico e il silenziamento genico che hanno aumentato la nostra comprensione dei processi biologici complessi e consentito l’uso della terapia genica per il trattamento di diversi tipi di malattie.
- I sistemi CRISPR-Cas sfruttano un meccanismo di difesa batterica che utilizza le sequenze CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) accoppiate con le endonucleasi Cas (CRISPR-associate) per tagliare il DNA genomico in posizioni mirate e rimuovere o sostituire i geni in vivo.
- Le nucleasi a dito di zinco (ZFN) sono costituite da DNA binding domain fusi con una endonucleasi e sono in grado di tagliare il DNA in siti specifici per l'editing genetico.
- I reagenti RNAi come gli short hairpin RNA (shRNA) e gli small interfering RNA (siRNA) limitano i livelli di trascritto sopprimendo la trascrizione o attivando processi di degradazione dell'RNA sequenza-specifici.
Per continuare a leggere, autenticati o crea un account.
Non hai un Account?