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Colture di microorganismi

Colture batteriche in piastre agarizzate

Le colture di microorganismi sono utilizzate in biologia molecolare per il clonaggio e l’espressione delle proteine ricombinanti Inoltre sono impiegate in ambito clinico per isolare, rilevare e identificare i microorganismi responsabili di una determinata malattia. La coltura microbica consente la crescita e la divisione cellulare in condizioni di laboratorio controllate. I batteri e altri microorganismi possono essere coltivati in brodo liquido o in terreni di coltura agarizzati utilizzando tecniche asettiche per prevenire le contaminazioni.

Clonaggio e produzione di proteine ricombinanti

Le colture batteriche vengono utilizzate per l'espressione di proteine ricombinanti, per il clonaggio e l'amplificazione dei plasmidi e per il clonaggio di BAC (cromosomi artificiali batterici) e cosmidi. Le cellule batteriche possono essere alterate così che assorbano e incorporino geni e plasmidi esogeni attraverso il processo di trasformazione. La trasformazione delle cellule competenti avviene tipicamente attraverso l'elettroporazione o lo shock termico di cellule competenti pre-trattate chimicamente.

I batteri trasformati vengono quindi identificati e selezionati in base alla resistenza agli antibiotici acquisita con l’introduzione del DNA plasmidico ricombinante o utilizzando lo screening "blu-bianco”che identifica i batteri ricombinanti in quanto in grado di esprimere la β-galattosidasi. Anche il lievito può essere trasformato utilizzando l'elettroporazione o altri metodi per analisi quali il saggio del doppio ibrido per lo studio di interazioni tra proteine e l’analisi di geni reporter per studiare l’espressione proteica.

Colture per l'isolamento e l'identificazione di microorganismi

Le colture microbiche sono importanti dal punto di vista medico per l'isolamento, il rilevamento e la differenziazione di di batteri ed altri microorganismi che possono causare malattie infettive. La caratterizzazione e l'identificazione mediante metodi di coltura si basano sia sul fenotipo che sul genotipo dei microorganismi in esame. Le cellule possono essere isolate mediante la semina per striscio su piastra, che consente di ottenere colonie pure. I terreni selettivi vengono utilizzati per inibire la crescita di alcuni gruppi di microorganismi, consentendo la crescita di altri. I terreni differenziali contengono composti che consentono di differenziare i microorganismi visivamente in base all'aspetto della colonia o ai cambiamenti osservabili nel terreno circostante derivanti da differenze nell'attività metabolica o emolitica. Questi terreni consentono l’identificazione di batteri e altri microorganismi attraverso la differenziazione e l'eliminazione.


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