MAB3404
Anticorps anti-cytokératine 18, clone CK2
clone CK2, Chemicon®, from mouse
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
mouse
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
purified immunoglobulin
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
CK2, monoclonal
Espèces réactives
human
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
immunocytochemistry: suitable
immunohistochemistry: suitable
Isotype
IgG1
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
wet ice
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Informations sur le gène
human ... KRT18(3875)
Spécificité
L'anticorps réagit avec la cytokératine n° 18 d'origine humaine. Cet anticorps est utilisé pour la coloration d'échantillons de recherche d'une grande variété d'épithéliums simples et d'épithéliums glandulaires simples ( p. ex. épithéliums intestinaux, respiratoires et urinaires) et d'épithéliums de transition (p. ex. vessie), mais les épithéliums pavimenteux stratifiés ne sont pas colorés (p. ex. œsophage, épiderme). Les filaments de kératine des lignées cellulaires telles que HeLa sont colorés (Debus et al., 1982). Pour la coloration d'échantillons de recherche de matériel tumoral humain avec cet anticorps, voir Debus et al., 1984. Pour le motif des cytokératines de différents tissus, voir Moll et al. 1982.
Immunogène
Préparation du cytosquelette de cellules HeLa (Debus et al., 1982).
Application
Immunocytochimie : 20 μg/ml
Immunohistochimie : 20 μg/ml. Ne convient pas aux tissus fixés au formaldéhyde.
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
Protocoles d'immunohistochimie et d'immunocytochimie :
Les spécimens idéaux sont obtenus à partir de coupes congelées d'échantillons de tissus ayant subi une congélation rapide. Les coupes congelées sont séchées à l'air et fixées avec de l'acétone entre -15 °C et -25 °C pendant 10 minutes. L'excédent d'acétone est évaporé entre 15 et 25 °C. Le matériel fixé dans l'alcool et inclus en paraffine peut cependant être utilisé, voir (4). Pour la détection immunohistochimique de la cytokératine nº 18 dans des coupes de tissu, le tissu ne doit pas être fixé dans du formaldéhyde, car ce fixateur réduit considérablement l'intensité de la coloration des filaments de cytokératine. Il est avantageux de bloquer les sites de liaison non spécifiques en recouvrant les coupes de sérum de veau fœtal pendant 20-30 min à 15-25 °C. Le surplus de sérum de veau fœtal est éliminé par décantation avant application de la solution d'anticorps.
Les préparations de cellules uniques ou de frottis cellulaires obtenues par cytocentrifugation sont également fixées dans de l'acétone. Ces préparations ne doivent cependant pas être séchées à l'air. Au lieu de cela, le surplus d'acétone est éliminé par un bref lavage dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). La suite du traitement est alors la suivante :
• Recouvrir la préparation avec 10-20 μl de solution d'anticorps et incuber dans une chambre humide à 37 °C pendant 1 heure.
• Plonger brièvement la lame dans du PBS, puis laver 3 fois dans du PBS pendant 3 minutes (en utilisant un nouveau bain de PBS à chaque fois).
• Essuyer les bords de la préparation et recouvrir la préparation avec 10-20 μl d'un anticorps anti-IgG de souris-FITC ou anti-IgG de souris-peroxydase et laisser incuber pendant 1 heure à 37 °C dans une chambre humide.
• Laver la lame comme indiqué ci-dessus. La préparation ne doit sécher à aucun moment au cours des différentes étapes. Si l'on utilise une technique d'immunofluorescence indirecte, la préparation doit être recouverte d'un milieu d'inclusion approprié (p. ex. Moviol, Hoechst) et examinée au microscope à fluorescence.
Si un conjugué à la POD a été utilisé comme anticorps secondaire, la préparation doit être recouverte d'une solution de substrat (voir ci-dessous) et incubée à 15-25 °C jusqu'à ce qu'une couleur rouge-brun clairement visible se développe. Un témoin négatif (p. ex. uniquement l'anticorps secondaire) ne doit pas changer de couleur au cours de cette période d'incubation.
Laver le substrat avec du PBS et colorer la préparation, si souhaité, avec une coloration à l'hémalum, pendant environ 1 minute. La solution d'hémalum est éliminée avec du PBS, la préparation est incorporée et examinée.
Solutions de substrat :
Amino-éthyl-carbazole. Dissoudre 2 mg de 3-amino-9-éthylcarbazole dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde et ajouter 28,8 ml de Tris-HCI, 0,05 M, pH 7,3 et 20 μl de H2O2 à 3 % (p/v). Préparer une nouvelle solution chaque jour. Diaminobenzidine. Dissoudre 25 mg de 3,3′-diaminobenzidine dans 50 ml de Tris-HCI, 0,05 M, pH 7,3 et ajouter 40 µl de H2O2, 3 % (p/v). Préparer une nouvelle solution chaque jour.
Immunohistochimie : 20 μg/ml. Ne convient pas aux tissus fixés au formaldéhyde.
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
Protocoles d'immunohistochimie et d'immunocytochimie :
Les spécimens idéaux sont obtenus à partir de coupes congelées d'échantillons de tissus ayant subi une congélation rapide. Les coupes congelées sont séchées à l'air et fixées avec de l'acétone entre -15 °C et -25 °C pendant 10 minutes. L'excédent d'acétone est évaporé entre 15 et 25 °C. Le matériel fixé dans l'alcool et inclus en paraffine peut cependant être utilisé, voir (4). Pour la détection immunohistochimique de la cytokératine nº 18 dans des coupes de tissu, le tissu ne doit pas être fixé dans du formaldéhyde, car ce fixateur réduit considérablement l'intensité de la coloration des filaments de cytokératine. Il est avantageux de bloquer les sites de liaison non spécifiques en recouvrant les coupes de sérum de veau fœtal pendant 20-30 min à 15-25 °C. Le surplus de sérum de veau fœtal est éliminé par décantation avant application de la solution d'anticorps.
Les préparations de cellules uniques ou de frottis cellulaires obtenues par cytocentrifugation sont également fixées dans de l'acétone. Ces préparations ne doivent cependant pas être séchées à l'air. Au lieu de cela, le surplus d'acétone est éliminé par un bref lavage dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). La suite du traitement est alors la suivante :
• Recouvrir la préparation avec 10-20 μl de solution d'anticorps et incuber dans une chambre humide à 37 °C pendant 1 heure.
• Plonger brièvement la lame dans du PBS, puis laver 3 fois dans du PBS pendant 3 minutes (en utilisant un nouveau bain de PBS à chaque fois).
• Essuyer les bords de la préparation et recouvrir la préparation avec 10-20 μl d'un anticorps anti-IgG de souris-FITC ou anti-IgG de souris-peroxydase et laisser incuber pendant 1 heure à 37 °C dans une chambre humide.
• Laver la lame comme indiqué ci-dessus. La préparation ne doit sécher à aucun moment au cours des différentes étapes. Si l'on utilise une technique d'immunofluorescence indirecte, la préparation doit être recouverte d'un milieu d'inclusion approprié (p. ex. Moviol, Hoechst) et examinée au microscope à fluorescence.
Si un conjugué à la POD a été utilisé comme anticorps secondaire, la préparation doit être recouverte d'une solution de substrat (voir ci-dessous) et incubée à 15-25 °C jusqu'à ce qu'une couleur rouge-brun clairement visible se développe. Un témoin négatif (p. ex. uniquement l'anticorps secondaire) ne doit pas changer de couleur au cours de cette période d'incubation.
Laver le substrat avec du PBS et colorer la préparation, si souhaité, avec une coloration à l'hémalum, pendant environ 1 minute. La solution d'hémalum est éliminée avec du PBS, la préparation est incorporée et examinée.
Solutions de substrat :
Amino-éthyl-carbazole. Dissoudre 2 mg de 3-amino-9-éthylcarbazole dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde et ajouter 28,8 ml de Tris-HCI, 0,05 M, pH 7,3 et 20 μl de H2O2 à 3 % (p/v). Préparer une nouvelle solution chaque jour. Diaminobenzidine. Dissoudre 25 mg de 3,3′-diaminobenzidine dans 50 ml de Tris-HCI, 0,05 M, pH 7,3 et ajouter 40 µl de H2O2, 3 % (p/v). Préparer une nouvelle solution chaque jour.
L'utilisation de cet anticorps anti-cytokératine 18, clone CK2, a été validée en IC et IH pour la détection de la cytokératine 18.
Liaison
Remplace le(s) produit(s) suivant(s) : 04-586
Forme physique
Format : purifié
Stockage et stabilité
L'anticorps lyophilisé est stable lorsqu'il est conservé à -20 °C. Conserver la solution d'anticorps reconstituée entre 2 et 8 °C, jusqu'à 12 mois. NE PAS CONGELER.
Autres remarques
Concentration : la concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
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Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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Wachter, B, et al.
Journal of Hepatology, 11, 232-239 (1990)
[Monoclonal antibodies--new probes for diagnosis and therapy. Their use as an example of the micrometastasizing of solid tumors]
Schlimok, G, et al.
Arzneimittelforschung, 38, 435-437 (1988)
T S Weiss et al.
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E Debus et al.
The American journal of pathology, 114(1), 121-130 (1984-01-01)
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E Debus et al.
The EMBO journal, 1(12), 1641-1647 (1982-01-01)
Four monoclonal antibodies designated CK1 - CK4 were obtained from fusions of mouse myeloma F0 cells with spleen cells from BALB/c mice immunized with cytoskeletal preparations made by treatment of human HeLa cells with non-ionic detergents. These IgG1 type antibodies
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