ABN249
Anticorps anti-adduits de Michael avec le HNE (réduits)
serum, from rabbit
Synonyme(s) :
Reduced 4-hydroxy-trans-2-nonenal Michael adducts, Reduced HNE Michael adducts
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
rabbit
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
serum
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
polyclonal
Espèces réactives
bovine, human
Technique(s)
western blot: suitable
Conditions d'expédition
ambient
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Description générale
Les aldéhydes réactifs générés durant la peroxydation des lipides contribuent à l'altération des cellules et des tissus associée au stress oxydatif. Les composés carbonylés alpha,bêta-insaturés tels que le 4-hydroxy-2-nonénal (HNE), le 4-oxo-2-nonénal (ONE) et l'acroléine, générés par oxydation d'acides gras polyinsaturés (AGPI, ou PUFA en anglais), interagissent facilement avec les groupes nucléophiles présents sur les protéines, produisant une réticulation intramoléculaire ou intermoléculaire des protéines. Il existe deux types de modification par le HNE : le premier type est formé par une réaction d'addition de Michael 1:1 avec le groupement amine de la lysine, le groupement imidazole de l'histidine, ou le groupement sulfhydryle de la cystéine ; le second type est produit lorsqu'une molécule de HNE réagit simultanément avec deux groupements amine de deux N-alpha-acétyllysines (NAL), on parle alors d'adduit de Michael/base de Schiff. Dans le second cas, l'adduit de Michael/base de Schiff initial non fluorescent lysine-HNE 2:1 subit ensuite une cyclisation oxydante pour former un dérivé fluorescent du type 2-hydroxy-3-imino-1,2-dihydropyrrol, communément appelé fluorophore HNE. L'adduit de Michael HNE-Lys formé de façon réversible n'est pas stable ; une réduction avec du borohydrure de sodium (NaBH4) est donc souvent employée pour préserver la modification Lys-HNE dans les échantillons protéiques. Une stabilisation réductrice par un traitement au NaBH4 est aussi utilisée pour prévenir la perte de la fraction 4-HNE sur l'adduit de Michael 4-HNE-Cys par une rétro-addition de Michael (RMA) durant les analyses MS/MS avec dissociation induite par collision (CID) et dissociation par transfert d'électron (ETD).
Spécificité
Cet antisérum polyclonal a permis de détecter la BSA modifiée par du HNE uniquement après, et non pas avant, réduction au borohydrure de sodium.
La modification ciblée ne présente pas de spécificité vis-à-vis de l'espèce.
Immunogène
KLH modifiée par du HNE et chimiquement réduite par du borohydrure de sodium.
Application
L'anticorps anti-adduits de Michael avec le HNE (réduits), réf. ABN249, est un anticorps polyclonal de lapin hautement spécifique qui cible la forme réduite des adduits de Michael avec le 4-hydroxy-2-nonénal et qui a été testé en western blotting.
Notes d'application :
1. La référence ABN249 remplace la référence Calbiochem 393207. ABN249 devrait fonctionner en immunocytochimie et immunohistochimie. Consulter les citations données pour la référence 393207 pour obtenir des exemples de préparation d'échantillon et de détection dans ces deux types d'application :
Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (Immunocytochimie).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):1030-1037 (Immunohistochimie).
2. L'anticorps anti-fluorophore HNE, réf. 393206, est également disponible pour la détection du fluorophore HNE par ELISA, immunohistochimie et western blotting.
3. Pour générer un contrôle positif pour le western blotting, traiter une solution de BSA à 2 mg/ml dans du KH2PO4 10 mM à pH 7,4, avec du HNE 0,1 à 0,5 mM, puis incuber pendant 1 h à 37 °C. La réaction peut être suivie en mesurant la baisse de l'absorbance du HNE à 224 nm (coefficient d'extinction 13,750/M). Le HNE peut être éliminé par filtration sur gel et dialyse à l'issue de la réaction chimique.
Les adduits de Michael avec le HNE dans les solutions protéiques doivent être réduits par voie chimique avec du borohydrure de sodium (NaBH4) avant analyse avec la référence ABN1348. Une solution de NaBH4 100 mM préparée de frais dans du NaOH 1 mM est ajoutée selon un rapport de 1/9 (v/v) à la solution d'échantillon protéique de façon à atteindre une concentration finale de NaBH4 de 10 mM. La solution protéique est maintenue à température ambiante pendant 10 à 30 min avant extinction par addition de 5 à 10 équivalents molaires d'acétone.
1. La référence ABN249 remplace la référence Calbiochem 393207. ABN249 devrait fonctionner en immunocytochimie et immunohistochimie. Consulter les citations données pour la référence 393207 pour obtenir des exemples de préparation d'échantillon et de détection dans ces deux types d'application :
Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554-35566 (Immunocytochimie).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):1030-1037 (Immunohistochimie).
2. L'anticorps anti-fluorophore HNE, réf. 393206, est également disponible pour la détection du fluorophore HNE par ELISA, immunohistochimie et western blotting.
3. Pour générer un contrôle positif pour le western blotting, traiter une solution de BSA à 2 mg/ml dans du KH2PO4 10 mM à pH 7,4, avec du HNE 0,1 à 0,5 mM, puis incuber pendant 1 h à 37 °C. La réaction peut être suivie en mesurant la baisse de l'absorbance du HNE à 224 nm (coefficient d'extinction 13,750/M). Le HNE peut être éliminé par filtration sur gel et dialyse à l'issue de la réaction chimique.
Les adduits de Michael avec le HNE dans les solutions protéiques doivent être réduits par voie chimique avec du borohydrure de sodium (NaBH4) avant analyse avec la référence ABN1348. Une solution de NaBH4 100 mM préparée de frais dans du NaOH 1 mM est ajoutée selon un rapport de 1/9 (v/v) à la solution d'échantillon protéique de façon à atteindre une concentration finale de NaBH4 de 10 mM. La solution protéique est maintenue à température ambiante pendant 10 à 30 min avant extinction par addition de 5 à 10 équivalents molaires d'acétone.
Qualité
Produit évalué par western blotting sur de la BSA-HNE réduite.
Analyse par western blotting : Une dilution au 1/10 000e de cet anticorps a permis de détecter 10 ng de BSA modifiée par du HNE uniquement après, et non pas avant, réduction au borohydrure de sodium.
Analyse par western blotting : Une dilution au 1/10 000e de cet anticorps a permis de détecter 10 ng de BSA modifiée par du HNE uniquement après, et non pas avant, réduction au borohydrure de sodium.
Description de la cible
Variable en fonction de la taille de la (des) protéine(s) modifiée(s) par le HNE. Des bandes non caractérisées peuvent apparaître avec certains lysats.
Liaison
Remplace : Calbiochem 393207
Remarque sur l'analyse
Contrôle
BSA modifiée par du HNE et chimiquement réduite par du borohydrure de sodium.
BSA modifiée par du HNE et chimiquement réduite par du borohydrure de sodium.
Autres remarques
Concentration : La concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.
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Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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