17-10226
Biocapteur lentiviral LentiBrite PSD95-RFP
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About This Item
Code UNSPSC :
12352207
eCl@ss :
34360190
Nomenclature NACRES :
NA.51
Produits recommandés
Description générale
Lisez note d'application dans Nature Methods !
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(cliquez ici !)
Découvrez les avantages de nos capteurs lentiviraux LentiBrite ! Cliquez ici
Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence ou l'absence d'une protéine donnée, ainsi que la localisation subcellulaire de cette protéine dans une cellule vivante. Les marqueurs fluorescents sont souvent utiles pour visualiser la protéine d'intérêt au sein d'une cellule, soit par microscopie à fluorescence, soit par capture vidéo en accéléré. Visualiser les cellules vivantes sans les perturber permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes du type vecteur lentiviral constituent un outil de recherche populaire qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection vis-à-vis des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme, et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-conditionnées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour la visualisation de cellules vivantes dans différents états cellulaires/pathologiques et l'analyse in vitro.
Les particules lentivirales LentiBrite PSD-95-RFP de EMD Millipore procurent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de la PSD dans des cellules neuronales vivantes.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence ou l'absence d'une protéine donnée, ainsi que la localisation subcellulaire de cette protéine dans une cellule vivante. Les marqueurs fluorescents sont souvent utiles pour visualiser la protéine d'intérêt au sein d'une cellule, soit par microscopie à fluorescence, soit par capture vidéo en accéléré. Visualiser les cellules vivantes sans les perturber permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes du type vecteur lentiviral constituent un outil de recherche populaire qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection vis-à-vis des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme, et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-conditionnées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour la visualisation de cellules vivantes dans différents états cellulaires/pathologiques et l'analyse in vitro.
- Pré-conditionnés, marqués par fluorescence avec de la GFP et de la RFP
- Transfection plus efficace que les méthodes traditionnelles de transfection par voie chimique et autres techniques non virales
- Possibilité de transfecter des cellules en division, non en division, et des types de cellules difficiles à transfecter tels que les cellules primaires ou les cellules souches
- Ne perturbe pas les fonctions cellulaires
Les particules lentivirales LentiBrite PSD-95-RFP de EMD Millipore procurent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de la PSD dans des cellules neuronales vivantes.
Le côté post-synaptique d'une synapse excitatrice contient une région riche en électrons et en protéines, la densité post-synaptique (PSD), qui positionne les neurotransmetteurs à proximité des sites de libération de neurotransmetteur post-synaptique, et concentre les molécules de signalisation. Les MAGUK ("membrane-associated guanylate kinases") servent à la fois d'organisateurs centraux de la PSD et de molécules de signalisation. Une MAGUK en particulier, la PSD-95, est associée aux épines dendritiques des synapses matures, et est relativement immobile par rapport à d'autres MAGUK. De la PSD-95 fusionnée à des protéines fluorescentes a été employée pour quantifier le renouvellement et la mobilité de la PSD-95.
Les particules lentivirales LentiBrite PSD-95-RFP de EMD Millipore procurent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de la PSD dans des cellules neuronales vivantes.
Les particules lentivirales LentiBrite PSD-95-RFP de EMD Millipore procurent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de la PSD dans des cellules neuronales vivantes.
Application
Imagerie par microscopie à fluorescence :
Des cellules de neurones hippocampiques primaires de rat ont été déposées sur une lamelle couvre-objet à chambre recouverte de poly-D-lysine pendant 5 jours, puis ont subi une transduction par des particules lentivirales selon une MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et deux semaines d'incubation supplémentaires, les cellules ont été observées en temps réel par imagerie en microscopie en fluorescence à champ large en immersion dans de l'huile. La PSD95-RFP montre une distribution en pointillés le long des neurites.
Pour une visualisation optimale en fluorescence et une analyse optimale des cellules vivantes, il est recommandé d'évaluer le niveau d'expression cible dans les 24 à 48 heures suivant la transfection/l'infection, car l'intensité de fluorescence peut faiblir avec le temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des MOI supérieures peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Des cellules de neurones hippocampiques primaires de rat ont été déposées sur une lamelle couvre-objet à chambre recouverte de poly-D-lysine pendant 5 jours, puis ont subi une transduction par des particules lentivirales selon une MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et deux semaines d'incubation supplémentaires, les cellules ont été observées en temps réel par imagerie en microscopie en fluorescence à champ large en immersion dans de l'huile. La PSD95-RFP montre une distribution en pointillés le long des neurites.
Pour une visualisation optimale en fluorescence et une analyse optimale des cellules vivantes, il est recommandé d'évaluer le niveau d'expression cible dans les 24 à 48 heures suivant la transfection/l'infection, car l'intensité de fluorescence peut faiblir avec le temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des MOI supérieures peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Domaine de recherche
Neurosciences
Neurosciences
Sous-domaine de recherche
Synapse et biologie synaptique
Synapse et biologie synaptique
Composants
Lentivirus TagPSD95-RFP :
Un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 x 10E8 unités infectieuses (UI) par ml. Pour connaître le titre spécifique d'un lot, consulter le paragraphe “Titre viral” de la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (UI) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI permettant d'obtenir une grande efficacité de transduction et un signal de forte intensité pour les neurones se situent généralement dans le plage de 20 à 40. Pour cette cible, certains types de cellules neuronales peuvent nécessiter une MOI supérieure ou inférieure.
REMARQUE : La MOI doit être quantifiée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type de cellule et chaque cible lentivirale, afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité de signal souhaitées.
Un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 x 10E8 unités infectieuses (UI) par ml. Pour connaître le titre spécifique d'un lot, consulter le paragraphe “Titre viral” de la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (UI) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI permettant d'obtenir une grande efficacité de transduction et un signal de forte intensité pour les neurones se situent généralement dans le plage de 20 à 40. Pour cette cible, certains types de cellules neuronales peuvent nécessiter une MOI supérieure ou inférieure.
REMARQUE : La MOI doit être quantifiée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type de cellule et chaque cible lentivirale, afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité de signal souhaitées.
Qualité
Évaluée par transduction de cellules HT-1080 et imagerie en fluorescence afin d'estimer l'efficacité de transduction.
Forme physique
Précipitation au PEG
Stockage et stabilité
Manipulation et stockage
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à partir de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler sous forme d'aliquotes de travail à -80 °C. Les aliquotes congelés peuvent être conservés au moins 2 mois. D'autres congélations/décongélations peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de niveau de sécurité biologique 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible dans la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à partir de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler sous forme d'aliquotes de travail à -80 °C. Les aliquotes congelés peuvent être conservés au moins 2 mois. D'autres congélations/décongélations peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de niveau de sécurité biologique 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible dans la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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