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Merck

SAE0067

Sigma-Aldrich

SUMO-Protease

His tagged recombinant protein, lyophilized powder

Synonym(e):

Kleine Ubiquitin-ähnliche Modifikator-Protease, ULP, Ubiquitin-Homologie-Domäne-Protein PIC1, Ubiquitin-ähnliche Protease, Ubl-spezifische Protease 1

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About This Item

UNSPSC-Code:
12352204
NACRES:
NA.54

Rekombinant

expressed in E. coli

Qualitätsniveau

Assay

≥95% (SDS-PAGE)

Form

lyophilized powder

Mol-Gew.

27 kDa

Versandbedingung

ambient

Lagertemp.

−20°C

Allgemeine Beschreibung

Bei SUMO-Proteasen handelt es sich um eine allgemeine Enzymklasse, die speziell die als kleiner Ubiquitin-ähnlicher Modifikator (SUMO) bezeichnete posttranslationale Proteinmodifikation (PTM) entfernt, welche der PTM-Klasse der Ubiquitin- bzw. Ubiquitin-ähnlichen Proteine (UBL) angehört. Das häufig als „SUMO-Protease“ bezeichnete Enzym ist die aus Saccharomyces cerevisiae stammende Ubl-spezifische Protease 1 (Ulp1). Dies war die erste dieser Enzymklasse, die isoliert wurde. SUMO-Protease dient der spezifischen Spaltung der SUMO-Einheit ohne „Narbenbildung“. SUMO-Protease erkennt die tertiäre Struktur der Ubiquitin-ähnlichen SUMO-Domäne und hydrolysiert die Peptidbindung in der x–Gly–Gly–x-Sequenz nach der Gly-Gly-Bindung am C-terminalen Ende der SUMO-Domäne. SUMO-Protease spaltet nicht nur natürliche SUMO-modifizierte Proteine, sondern auch rekombinante SUMO-Fusionsproteine. Die SUMO-Domäne ist ein bekanntes löslichkeitsverbesserndes Fusions-Tag, das für die rekombinante Proteinexpression verwendet wird. Am N-terminalen Ende der SUMO-Domäne kann ein Histidin-Tag hinzugefügt werden, das als Aufreinigungs-Tag fungiert. Dieses SUMO-Proteaseprodukt beinhaltet einen 6x-Histidin-Tag. Daher kann es nach der Verdauungsreaktion zusammen mit der gespaltenen SUMO-Domäne leicht entfernt werden.
SUMO-Protease ist über einen weiten Bereich an Temperaturen (2–30 °C), Ionenstärken (0–400 mM NaCl) und pH-Werten (6–8,5) aktiv. Ihre Aktivität kann allerdings je nach Substrat und Bedingungen variieren. Forscher müssen daher ihre spezifischen Reaktionsbedingungen optimieren. Es wird vorgeschlagen, zunächst 20 Einheiten an SUMO-Protease pro mg Zielprotein für 1 Stunde bei 30 °C oder über Nacht bei 2–8 °C zu verwenden. Der Spaltungsgrad kann mittels SDS-PAGE beurteilt werden. Die Menge an SUMO-Protease kann dann je nach Bedarf angepasst werden. SUMO-Protease ist wirksamer in Gegenwart von Reduktionsmitteln wie beispielsweise 0,5–2 mM DTT. Durch Zugabe von DTT zum Reaktionsgemisch wird der Spaltungsgrad insbesondere bei längeren Inkubationen signifikant erhöht.
Das rekonstituierte Produkt bei -20 °C aufbewahren. Es wird empfohlen, das Enzym entweder in 100 μL Wasser oder 50 % Glycerin (v/v), das mit 1 mM DTT angereichert wurde, zu rekonstituieren. Lösungen in Wasser/DTT sollten in gefrorenen Aliquoten gelagert werden, um Gefrier-/Auftauzyklen zu vermeiden, die die Proteaseaktivität negativ beeinflussen können.

Einheitendefinition

Eine Enzymeinheit ist als die Menge definiert, die 90 % von 100 pmol SUMO-GST in 1 Stunde bei 30 °C schneidet.

Lagerklassenschlüssel

11 - Combustible Solids

WGK

WGK 2

Flammpunkt (°F)

Not applicable

Flammpunkt (°C)

Not applicable


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Chuanwu Xia et al.
iScience, 24(10), 103153-103153 (2021-10-15)
The dual function protein ACAD9 catalyzes α,β-dehydrogenation of fatty acyl-CoA thioesters in fatty acid β-oxidation and is an essential chaperone for mitochondrial respiratory complex I (CI) assembly. ACAD9, ECSIT, and NDUFAF1 interact to form the core mitochondrial CI assembly complex.
Camille Le Gall et al.
Journal for immunotherapy of cancer, 10(4) (2022-04-17)
Type 1 conventional dendritic cells (cDC1s) are characterized by their ability to induce potent CD8+ T cell responses. In efforts to generate novel vaccination strategies, notably against cancer, human cDC1s emerge as an ideal target to deliver antigens. cDC1s uniquely
Sho W Suzuki et al.
eLife, 10 (2021-09-16)
Membrane protein recycling systems are essential for maintenance of the endosome-lysosome system. In yeast, retromer and Snx4 coat complexes are recruited to the endosomal surface, where they recognize cargos. They sort cargo and deform the membrane into recycling tubules that
J Brooks Crickard et al.
Cell, 181(6), 1380-1394 (2020-06-06)
Homologous recombination (HR) helps maintain genome integrity, and HR defects give rise to disease, especially cancer. During HR, damaged DNA must be aligned with an undamaged template through a process referred to as the homology search. Despite decades of study

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