ORFPOOLWG

MISSION^® TRC3-Humangesamtgenom-Lentivirus-ORF-Pool

• UNSPSC-Code: 12352200

Eigenschaften

• Verpackung: pkg of 8x25 μL (vials)
• Qualitätsniveau: 200
• Konzentration: 5x10⁸ VP/ml (via p24 assay)
• Methode(n): capture ELISA: 5 × 10⁸ TU/mL using p24
• Versandbedingung: dry ice
• Lagertemp.: −70°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Bis dato verfügen wir über die größte Sammlung von vollständig sequenzierten und vorgeklonten menschlichen Open Reading Frames (ORF) und bieten diese in einem gepoolten, lentiviralen Gesamtgenom-Format an. Die am Broad Institute entwickelte MISSION^® TRC3-Humangesamtgenom-ORF-Pool-Bibliothek enthält über 17.000 eindeutige ORF-Klonen mit Kodierung für über 14.000 Gene zur Verwendung im Überexpression-Screening. Diese exklusive Bibliothek enthält eine eindeutige 24-Nukleotid-Barcodesequenz für jeden ORF-Klon zur leichten Erkennung von Treffern und Tiefen-Sequenzierung/Dekonvolution.
Diese gebrauchsfertige MISSION TRC3-Human-LentiORF-Pool-Bibliothek ermöglicht eine stabile Integration, Zellanreicherung und Langzeit-Genexpression in schwierig zu transfektierenden Zelllinien und nutzt unsere Best-in-Class-Lentivirenproduktion. Diese Sammlung bietet Forschern einzigartige Werkzeuge, anhand derer sie sich durch Modulation der Gen- und Proteinexpression einen Einblick in die Genfunktion verschaffen können.

Der klassische genetische Ansatz für die Erforschung der biologischen Signalwege beginnt normalerweise mit der Identifizierung von Mutationen, die einen Phänotyp von Interesse hervorrufen. Überexpression oder Fehlexpression eines wildtypischen Genprodukts kann jedoch auch mutante Phänotypen hervorrufen. Diese sind für Genetiker ein alternatives, leistungsstarkes Werkzeug zur Identifizierung der Signalwegkomponenten, die bei der herkömmlichen Loss-of-Function-Analyse eventuell nicht erkannt werden. Der lentivirale Gesamtgenom-ORF-Pool füllt diese Lücke und bietet Forschern ein leistungsstarkes Werkzeug für die Durchführung entscheidender biologischer Experimente.

LentiORF sind ein ideales zeitsparendes Werkzeug für die Proteinexpression und Genanalyse, ob bei der Durchführung von Genüberexpressionsstudien oder Validierung von Gen-Knockdown/Knockout-Ergebnissen eines RNAi- oder CRISPR-Experiments. Des Weiteren müssen Forscher auch die „Treffer“ von Screenings validieren, um falsch positive Ergebnisse zu bestätigen und auszuschalten. Es muss bestätigt werden, ob die erkannten Phänotypen mit dem Zielgen von Interesse verbunden sind. Die weithin akzeptierte Methode für die Validierung eines Zielgens ist die erneute Expression des Gens von Interesse mittels LentiORF.

Die MISSION TRC3 Humangesamtgenom-LentiORF-Pool-Bibliothek wird in Aliquoten von 8×25 μl mit einem Mindesttiter von 5×10⁸ TU/ml (gemessen mittels p24-Assay) angeboten.

Anwendung

Funktionelle Genomik/Überexpressionstest/Targetvalidierung

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Effizientes Screening des menschlichen Gesamtgenoms (14.000+ Gene) direkt auf dem Arbeitstisch ohne Roboter oder Spezialausrüstung
• Vorgeklonte, sequenzbestätigte, expressionsbereite Klone
• Ideale zeitsparende Methode für die Proteinexpression: Verwendung von gepoolten lentiviralen ORF für die Expression von proteinkodierenden Genen zur Beurteilung deren Funktion
• Einfache Dekonvolution: Die Puromycin-Bibliothek enthält eine dem V5-Tag und Translationsstopp nachgeschaltete 24-Nukleotid-Barcodesequenz. Jeder Klon enthält eine eindeutige, leicht identifizierbare Barcodesequenz für die einfache Dekonvolution von gepoolten Screening-Experimenten
• Ein EF1a-Promoter steuert die Expression des ORF-Konstrukts und bietet sich als Alternative zum CMV-Promoter an, der bei bestimmten Zelltypen eventuell ungeeignet ist
• Puromycinresistenz ermöglicht Experimente mit Doppelselektion in Neomycin- oder Blasticidin.resistenten Zellen
• Angereicherte Zellpopulation: Durch Anwendung der Puromycinselektion nach der Transduktion kann eine langzeitig stabile Zelllinie erzeugt werden
• Das V5-Epitop-Tag ermöglicht Experimente mit Pulldown-Assays und Co-Immunpräzipitation zur Bestimmung der Protein-Protein-Wechselwirkungen oder Kennzeichnung und Visualisierung der ORF mittels Immunfluorszenz
• Positive und negative Selektionskontrollen (BFP und GFP) sind verfügbar und ermöglichen Forschern eine zuversichtliche Schätzung des Erfolgs ihrer gepoolten Screening-Experimente
• Lentivirale ORF können eine große Vielfalt von Säugetierzellen (einschließlich schwer zu transfektierende oder primäre Zelllinien) durch Transduktion infizieren, um eine Genüberexpression für Screening-Anwendungen zu bewirken
• Schnelles und wirtschaftliches Screening mit einfacher Treffer-Erkennung durch den Dekonvolution-Service von Sigma-Aldrich
• Zeitsparend: Keine PCR-, Klonierungs- und DNA-Sequenzierungsschritte für die Verifizierung erforderlich

Angaben zur Herstellung

Puro „Kill-Curve“ und Bestimmung der koloniebildenden Einheit (CFU) pro ml. Vor dem Bibliotheken-basierten Screening müssen zwei vorläufige Tests durchgeführt werden. Weitere Informationen finden Sie unter Lentipools oder im technischen Merkblatt.

Sonstige Hinweise

Das Produkt ist nur für Forschungs- und Entwicklungszwecke bestimmt und nicht für Arzneimittelanwendungen, häuslichen Gebrauch oder sonstige Zwecke vorgesehen. Informationen zu den Gefahren und zur sicheren Handhabung sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen. Obwohl die produzierten lentiviralen Transduktionspartikel replikationsinkompetent sind, wird dennoch empfohlen, diese bei der Handhabung im Labor als Organismen der Risikogruppe 2 zu behandeln. Alle veröffentlichten Richtlinien zur Risikogruppe 2 für die Handhabung im Labor und Abfalldekontaminierung sind zu befolgen.

Rechtliche Hinweise

MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable