CAS9PROT

Cas9-Protein

from Streptococcus pyogenes, recombinant, expressed in E. coli, 1X NLS

• Synonym(e): Cas9, SpCas9, SpyCas9
• UNSPSC-Code: 12352202
• NACRES: NA.51

Eigenschaften

• Rekombinant: expressed in E. coli
• Qualitätsniveau: 300
• Assay: ≥95% (SDS-PAGE)
• Form: lyophilized powder
• Verpackung: pkg of 1 kit (3 components)
• Anwendung(en): CRISPR
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

CAS9, das auch unter der Bezeichnung Cas5 und Csn1 bekannt ist, ist das Signaturgen des Typ II CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)-RuvC (Rnase H-Faltung)/Cas-Systems. CAS9 enthält 1388 Aminosäuren. Dieses Protein soll eine RuvC/RibonuKlease (RNase) H-Domäne enthalten, die an der crRNA-Reifung beteiligt ist sowie eine McrA/HNH-Signaturdomäne, die am DNA-Abbau beteiligt ist.

Rekombinantes Cas9-Protein aus Streptococcus pyogenes (~160 kD) ist ein gebrauchsfertiges Reagens für Genome-Engineering-Experimente. In Kombination mit zielspezifischer Guide-RNA agiert Wildtyp Streptococcus pyogenes-Cas9-Protein als eine gerichtete Nuklease, die sich für die Transfektion von Zellkulturen und die beschleunigte Entwicklung von genetisch modifizierten Tieren mittels Injektion eines einzelligen Embryos eignet.

Anwendung

Funktionelle Genomik/Targetvalidierung/Genome Editing

Biochem./physiol. Wirkung

CAS9 spielt eine wichtige Rolle bei der Plasmid-DNA-Interferenz. Es ist das einzige Cas-Protein, das für die Resistenz gegenüber Fremd-DNA benötigt wird. CAS9 stimuliert sowohl das RNA-gesteuerte Genome Editing als auch die Genregulierung in verschiedenen Organismen, kann jedoch immer nur eine dieser Aktivitäten in der jeweiligen Zelle fördern.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Hochspezifisch
• Hochaktiv
• Bereit zur Injektion/Transfektion

Verpackung

Pkg. mit 50 μg (≥ 300 pmol)
Pkg. mit 250 μg (≥ 1500 pmol)

Komponenten

Jedes Kit umfasst:

• ein Fläschchen mit rekombinantem Cas9-Protein
• ein Fläschchen mit 1 ml 1× Verdünnungspuffer
• ein Fläschchen mit 1 ml nukleasefreiem Wasser mit Glycerin

Prinzip

CRISPR/Cas-Systeme werden von Bakterien und Archaeen als Schutz vor angreifenden Viren und Plasmiden eingesetzt. Kürzlich wurde das CRISPR/Cas-System Typ II aus dem Bakterium Streptococcus pyogenes genetisch modifiziert, um in eukaryotischen Systemen unter Verwendung von zwei molekularen Komponenten zu funktionieren: ein einzelnes Cas9-Protein und eine nichtcodierende Guide-RNA (gRNA). Die Cas9-Endonuklease kann mit einer gRNA, die einen DNA-Doppelstrangbruch (DSB) an einer gewünschten Genomstelle steuert, programmiert werden. Ähnlich wie bei DSB, die durch Zinkfingernukleasen (ZFN) ausgelöst werden, aktiviert die Zelle anschließend den DNA-Reparaturprozess, entweder Non-homologous end-joining (NHEJ) oder homologe Reparatur, um den entsprechenden DSB zu heilen.

Rekonstituierung

Lyophilisiertes S. pyogenes Cas9-Protein sollte erneut in der Rekonstitutionslösung suspendiert werden, um die gewünschte Konzentration bereitzustellen. Tippen Sie sanft gegen das Röhrchen, um das lyophilisierte Pulver vollständig zu lösen, anschließend 10 Minuten auf Eis inkubieren und das Röhrchen schleudern, um das Material an den Boden des Röhrchens zu bringen.

Sonstige Hinweise

Verwenden Sie unser CRISPR Selection Tool, um gRNA zu bestellen

Sehen Sie sich unsere anderen MISSION^® Cas9-Proteine an: SigmaAldrich.com/CRISPRproteins

Rechtliche Hinweise

CRISPR-Nutzungslizenzvereinbarung

MISSION is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Nur Kit-Komponenten

• Cas9-NLS from Streptococcus pyogenes, expressed in Escherichia coli
• Dilution buffer for Cas9 proteins
• Reconstitution solution for Cas9 proteins

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable