PFHYS1008

Millicell^® HY Mehrschicht-Kulturflasche

T-1000, 5 layer, 200-300 mL, sterile, vented cap, Tissue Culture (TC)-treated surface

• Synonym(e): Gewebekultur, High Yield Culture Flask, Multilayer-Flasche, Zellkultur, Zellkulturflasche
• UNSPSC-Code: 41104923
• eCl@ss: 32011202
• NACRES: NB.22

Eigenschaften

• Materialien: high-density polyethylene cap; polystyrene flask
• Qualitätsniveau: 200
• Sterilität: sterile; γ-irradiated
• Leistungsmerkmale: 5 layer
• Verpackung: pack of 8
• Hersteller/Markenname: Millicell^®
• Parameter: 45 °C max. temp.
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable
• Höhe: 51 mm , excluding cap; 74 mm , including cap
• Länge: 22.2 cm
• Breite: 12 cm
• Oberflächenbereich: 1000 cm²
• Arbeitsvolumen: 200-300 mL
• Bindungsart: Tissue Culture (TC)-treated surface
• Versandbedingung: ambient

Beschreibung

Angaben zur Herstellung

1. Zum Anlegen von Zellen füllen Sie die Millicell HY T-1000-Kulturflasche mit dem gewünschten Nährmedium.
2. Fügen Sie die gewünschte Anzahl von Zellen hinzu, um eine typische Ansetzdichte zu erreichen.
3. Mischen Sie die Zellen und Medien durch mehrmaliges Auf- und Abpipettieren der Lösung, bis eine homogene Suspension erreicht ist. Hinweis: Wenn die Zellen nicht ausreichend zu einer homogenen Suspension gemischt werden, kann dies zur ungleichmäßigen Verteilung der Zellen über die Schichten der Millicell HY-Kulturflasche führen.
4. Die Kulturflasche kurz auf die Seite legen, damit sich das Flüssigkeitsvolumen gleichmäßig über die Kolbenschichten verteilt.
5. Die Kulturflasche neigen, damit sich das Flüssigkeitsvolumen für jede Kolbenschicht aufteilt.
6. Die Kulturflasche ablegen, damit sich die Zellsuspension gleichmäßig über die gesamte Oberfläche jeder Lage verteilt.
7. Je nach Volumen kann es erforderlich sein, die Kulturflasche nach allen vier Seiten zu schütteln, um sicherzustellen, dass die gesamte Oberfläche benetzt wird. Hinweis: Wenn sich das Flüssigkeitsvolumen auf einer der Schichten während des Benetzungsvorgangs ändert (z. B. Überlaufen von Flüssigkeit von der oberen Schicht in die unteren Schichten), wiederholen Sie die Schritte 4–6, um eine gleichmäßige Verteilung der Flüssigkeit über alle Schichten sicherzustellen.
8. Die Kulturflasche beim Transport zum Inkubator wieder in eine vertikale Position bringen. Die Kulturflasche flach in den Inkubator legen (wie in Schritt 6) und die Zellen unter geeigneten Bedingungen kultivieren.
9. Wenn ein Medienaustausch erforderlich ist, das Medium aus der Millicell HY T-1000-Kulturflasche entweder aspirieren oder gießen. Hinweis: Aufgrund der größeren Oberfläche der Millicell-Kulturflaschen kann es erforderlich sein, die Kulturflasche nach jeder Aspiration mehrere Minuten lang auf der Seite stehen zu lassen, damit sich alle verbleibende Flüssigkeit an einem Punkt sammelt und eine zweite Aspiration durchgeführt werden kann, bei der die verbleibende Flüssigkeit vollständig entfernt wird.
10. Geben Sie eine geeignete Menge frisches Medium hinzu und wiederholen Sie die Schritte 4–8.
11. Zum Ernten der Zellenentnehmen Sie das Medium wie in Schritt 9 beschrieben.
12. Geben Sie gewünschte Menge an geeigneter Waschlösung (z. B. PBS oder 0,02%iges EDTA) in die Kulturflasche und wiederholen Sie die Schritte 4–7.
13. Entfernen Sie die Waschlösung wie in Schritt 9 beschrieben.
14. Geben Sie die gewünschte Menge des Dissoziationsenzyms (z. B. 0,25 % Trypsin/EDTA oder gleichwertig) entsprechend dem bevorzugten Protokoll hinzu, wiederholen Sie die Schritte 4–8 und führen Sie die Inkubation durch. Das pro cm² erforderliche Volumen an Dissoziationsenzym muss nicht anders sein als für das T-Flaschen-Protokoll. Hinweis: Stellen Sie unter dem Mikroskop sicher, dass sich alle Zellen vollständig von der Oberfläche der Flasche gelöst haben. Wenn sich nicht alle Zellen von der Kulturoberfläche dissoziieren lassen (sodass alle Zellen frei beweglich sind), kann dies die Zellausbeute verringern.
15. Bei Verwendung von Trypsin geben Sie das gewünschte Volumen der inaktivierenden Lösung, z. B. Serum-enthaltende Medien, hinzu.
16. Entnehmen Sie die Zellen entweder durch Ansaugen oder durch Ausgießen wie in Schritt 9.

Rechtliche Hinweise

Millicell is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10-13 - German Storage Class 10 to 13