Kits d'isolement cellulaire

Même si l'étude de cellules dérivées de tissus in vivo donne les données les plus prédictives de la biologie et de la fonction des cellules, la complexité cellulaire peut entraîner une confusion des résultats, à moins que les populations de cellules cibles ne soient isolées. Afin d'étudier les phénotypes cellulaires, diverses méthodes ont évolué pour pouvoir isoler des populations de cellules sur la base de caractéristiques définitives. L'isolement de populations cellulaires non seulement aide la recherche en biologie, mais facilite également les tests de diagnostic clinique. Les méthodes d'isolement les plus efficaces offrent un rendement, une pureté et une viabilité supérieurs. Il est possible d'enrichir ou de purifier les populations cibles par sélection positive (employant souvent des anticorps qui se lient à des marqueurs spécifiques des cellules) ou par sélection négative (pouvant utiliser des propriétés biophysiques pour diminuer le nombre des cellules indésirables et ainsi enrichir la population cible).

Le fractionnement des cellules en leurs composants sous-cellulaires a longtemps été fondamental pour les études de biologie cellulaire. Les techniques de fractionnement sous-cellulaire sont largement utilisées pour étudier la structure et la fonction des organites et des compartiments sous-cellulaires, et pour comprendre la localisation, la transformation et le trafic des biomolécules. L'objectif de la plupart des techniques de fractionnement est d'obtenir des organites et des macromolécules cellulaires en état de fonctionnement, conservant leurs propriétés biochimiques intrinsèques. Pour ce faire, on procède souvent à une lyse des cellules avec un moyen mécanique doux ou des détergents doux, étape fréquemment suivie d'un fractionnement des composants cellulaires par centrifugation différentielle.

Isolement de cellules par phénotype

Les pré-adipocytes peuvent servir à étudier le processus de l'adipogenèse et, après différenciation, à évaluer la lipolyse, la signalisation cellulaire, la fonction endocrinienne et l'activité métabolique.

Notre kit d'isolement de pré-adipocytes combine les outils et les réactifs nécessaires pour isoler la fraction vasculaire stromale du tissu adipeux. La fraction vasculaire stromale ainsi obtenue est mise en culture sur une plaque de culture tissulaire, à laquelle les pré-adipocytes adhèrent. Les pré-adipocytes conservent la capacité de proliférer et de se différencier en adipocytes lorsqu'ils sont traités par des composés induisant la différenciation.

Isolement d'organites et de complexes sous-cellulaires

La dérivation des composants sous-cellulaires permet de mieux comprendre la fonction des organites et peut mener à l'émergence de nouvelles biotechnologies. Par exemple, des noyaux isolés à partir de cellules de mammifères peuvent servir à synthétiser des transcrits primaires d'ARN endogènes. Le kit de préparation EZ pour noyaux à haut rendement (NUC101, NUC201) a été développé dans le but d'isoler rapidement des noyaux à partir de la plupart des cellules de mammifères.

Pour la détection de l'intégrité mitochondriale et du potentiel de membrane, notre kit de coloration mitochondriale (CS0390, CS0760) utilise le colorant JC-1 (420200, T4069), qui se concentre dans la matrice mitochondriale pour former des agrégats fluorescents rouges. Les événements, comme l'apoptose, qui dissipent le potentiel de membrane des mitochondries empêchent l'accumulation du colorant JC-1 dans les mitochondries, et un microscope à fluorescence peut alors servir à distinguer les mitochondries viables de celles qui ont été endommagées.

Les complexes sous-cellulaires autres que les organites, comme les protéasomes, peuvent aussi être isolés en vue de tests protéolytiques. Notre méthode repose sur des billes de matrice d'affinité contenant une protéine de fusion à base de GST avec un domaine similaire à l'ubiquitine lié à de l'agarose-GST.

Enrichissement du cytosquelette

Travailler avec les protéines qui s'associent au cytosquelette d'actine est traditionnellement un vrai défi, du fait de l'insolubilité des éléments cytosquelettiques dans les détergents comme le Triton X-100. Le kit d'isolement et d'enrichissement du cytosquelette ProteoExtract^® de Millipore fournit des tampons de purification pour cytosquelette qui retiennent l'adhérence focale et les protéines associées à l'actine tout en éliminant les protéines nucléaires et cytoplasmiques solubles de la cellule. Cette approche améliore la capacité à détecter et étudier les protéines associées à l'actine de faible abondance qui sont souvent masquées dans les méthodes de western blotting pour l'analyse de lysats de cellules entières.