12209136001
Roche
Essai de longueur des télomères TeloTAGGG™
sufficient for ≤50 reactions, kit of 1 (15 components), suitable for cell culture
Synonyme(s) :
télomère
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About This Item
Code UNSPSC :
41105500
Produits recommandés
Utilisation
sufficient for ≤50 reactions
Niveau de qualité
Conditionnement
kit of 1 (15 components)
Fabricant/nom de marque
Roche
Technique(s)
cell culture | mammalian: suitable
Température de stockage
−20°C
Catégories apparentées
Description générale
Le kit repose sur l′analyse par Southern blot des fragments de restriction terminaux (TRF) obtenus par la digestion de l′ADN génomique à l′aide d′enzymes de restriction qui coupent fréquemment l′ADN.
Étape 1 : Digestion de l′ADN génomique
L′ADN génomique purifié est digéré par un mélange optimisé d′enzymes de restriction qui coupent fréquemment. Ces enzymes ont été sélectionnées pour éviter que l′ADN télomérique et sous-télomérique soit coupé. Cela est dû aux caractéristiques spéciales de la séquence des répétitions. L′ADN non télomérique est digéré pour former des fragments de faible poids moléculaire.
Étape 2 : Électrophorèse sur gel et analyse par Southern blot
Suite à la digestion de l′ADN, les fragments d′ADN sont séparés par électrophorèse sur gel, puis transférés à une membrane de nylon par la méthode de Southern.
Étape 3 : Hybridation et la détection par chimioluminescence
Les fragments d′ADN transférés sur la membrane sont hybridés à une sonde marquée à la digoxigénine (DIG) spécifique pour les répétitions télomériques, puis incubés avec un anticorps spécifique couplé de façon covalente à la phosphatase alcaline. Enfin, la sonde télomérique immobilisée est visualisée au moyen d′un substrat chimioluminescent hautement sensible de la phosphatase alcaline, CDP-Star. La longueur moyenne des fragments de restriction terminaux peut être déterminée en comparant les signaux à un standard de poids moléculaire.
Étape 1 : Digestion de l′ADN génomique
L′ADN génomique purifié est digéré par un mélange optimisé d′enzymes de restriction qui coupent fréquemment. Ces enzymes ont été sélectionnées pour éviter que l′ADN télomérique et sous-télomérique soit coupé. Cela est dû aux caractéristiques spéciales de la séquence des répétitions. L′ADN non télomérique est digéré pour former des fragments de faible poids moléculaire.
Étape 2 : Électrophorèse sur gel et analyse par Southern blot
Suite à la digestion de l′ADN, les fragments d′ADN sont séparés par électrophorèse sur gel, puis transférés à une membrane de nylon par la méthode de Southern.
Étape 3 : Hybridation et la détection par chimioluminescence
Les fragments d′ADN transférés sur la membrane sont hybridés à une sonde marquée à la digoxigénine (DIG) spécifique pour les répétitions télomériques, puis incubés avec un anticorps spécifique couplé de façon covalente à la phosphatase alcaline. Enfin, la sonde télomérique immobilisée est visualisée au moyen d′un substrat chimioluminescent hautement sensible de la phosphatase alcaline, CDP-Star. La longueur moyenne des fragments de restriction terminaux peut être déterminée en comparant les signaux à un standard de poids moléculaire.
Les télomères, structures protéiques spécialisées sur l′ADN situées à l′extrémité des chromosomes eucaryotes, sont constitués de petites séquences d′ADN répétées en tandem. De nombreuses séquences télomériques ont été identifiées et présentent très peu de variations de séquence, même entre des organismes phylogénétiquement différents comme Tetrahymena (séquence : TTGGGG) et l′être humain (séquence : TTAGGG).
Étant donné que l′ADN polymérase est incapable de répliquer les extrémités de l′ADN linéaire, il a été suggéré que les extrémités des chromosomes se raccourcissent progressivement à chaque cycle de réplication (on parle du « problème de réplication des extrémités »). Ce phénomène, qui a été démontré in vitro et in vivo, semble être lié à la capacité proliférative limitée des cellules somatiques normales (« horloge mitotique »). Comme les cellules germinales, les cellules souches et les cellules tumorales ont toutes une durée de vie prolongée ou même infinie, il a été suggéré que ces cellules doivent posséder un mécanisme particulier pour maintenir la longueur des télomères.
Le maintien de la longueur des télomères est associé à l′activation de la télomérase. Cette enzyme est une ribonucléoprotéine qui compense la perte de l′ADN télomérique en ajoutant des séquences répétées à l′extrémité des chromosomes, et utilise sa composante ARN intrinsèque comme matrice pour la synthèse de l′ADN.
Les télomères jouent un rôle essentiel dans la maintenance de la stabilité des chromosomes eucaryotes à l′intérieur d′une cellule en se liant spécifiquement à certaines protéines structurales. Ces protéines coiffent les extrémités des chromosomes linéaires, prévenant ainsi la dégradation nucléolytique, la fusion des chromosomes de bout en bout, leur recombinaison irrégulière, et d′autres événements qui sont normalement létaux pour une cellule.
L′analyse de la longueur des télomères dans les échantillons de cellules mononucléaires du sang périphérique humain pour la recherche révèle que la longueur des télomères diminue avec l′âge du donneur, reflétant l′histoire réplicative de ces cellules. Une accélération de la perte des télomères a été décrite dans plusieurs pathologies comme la trisomie 21, l′ataxie télangiectasie et l′infection par le VIH, suggérant que la réduction de la longueur des télomères peut être liée à la dysfonction immunitaire associée à ces troubles. Ce kit est destiné à accroître les connaissances scientifiques concernant ce phénomène.
Durée du test : Environ 18 heures
Échantillon : culture cellulaire et autres échantillons biologiques
Test non radioactif à détection par chimioluminescence pour déterminer la longueur des télomères.
Étant donné que l′ADN polymérase est incapable de répliquer les extrémités de l′ADN linéaire, il a été suggéré que les extrémités des chromosomes se raccourcissent progressivement à chaque cycle de réplication (on parle du « problème de réplication des extrémités »). Ce phénomène, qui a été démontré in vitro et in vivo, semble être lié à la capacité proliférative limitée des cellules somatiques normales (« horloge mitotique »). Comme les cellules germinales, les cellules souches et les cellules tumorales ont toutes une durée de vie prolongée ou même infinie, il a été suggéré que ces cellules doivent posséder un mécanisme particulier pour maintenir la longueur des télomères.
Le maintien de la longueur des télomères est associé à l′activation de la télomérase. Cette enzyme est une ribonucléoprotéine qui compense la perte de l′ADN télomérique en ajoutant des séquences répétées à l′extrémité des chromosomes, et utilise sa composante ARN intrinsèque comme matrice pour la synthèse de l′ADN.
Les télomères jouent un rôle essentiel dans la maintenance de la stabilité des chromosomes eucaryotes à l′intérieur d′une cellule en se liant spécifiquement à certaines protéines structurales. Ces protéines coiffent les extrémités des chromosomes linéaires, prévenant ainsi la dégradation nucléolytique, la fusion des chromosomes de bout en bout, leur recombinaison irrégulière, et d′autres événements qui sont normalement létaux pour une cellule.
L′analyse de la longueur des télomères dans les échantillons de cellules mononucléaires du sang périphérique humain pour la recherche révèle que la longueur des télomères diminue avec l′âge du donneur, reflétant l′histoire réplicative de ces cellules. Une accélération de la perte des télomères a été décrite dans plusieurs pathologies comme la trisomie 21, l′ataxie télangiectasie et l′infection par le VIH, suggérant que la réduction de la longueur des télomères peut être liée à la dysfonction immunitaire associée à ces troubles. Ce kit est destiné à accroître les connaissances scientifiques concernant ce phénomène.
Durée du test : Environ 18 heures
Échantillon : culture cellulaire et autres échantillons biologiques
Test non radioactif à détection par chimioluminescence pour déterminer la longueur des télomères.
Application
L′essai de longueur des télomères TeloTAGGG ™ est conçu pour être utilisé dans les applications de recherche en sciences de la vie :
- Détection sensible de l′ADN télomérique (séquence télomérique : TTAGGG) dans les cultures cellulaires et autres échantillons biologiques pour la recherche
- Détermination de la longueur des télomères de l′ADN dans des cultures cellulaires et d′autres échantillons biologiques pour la recherche
Caractéristiques et avantages
- Sûr : non radioactif
- Flexible : Détecte les télomères provenant de divers organismes, notamment les êtres humains et les souris
Conditionnement
1 kit contenant 15 composants
Séquence
La séquence et la longueur de la sonde sont confidentielles. Les marqueurs de poids moléculaire marqués à la DIG présents dans ce kit sont un mélange des marqueurs DIG MW III et VII
Notes préparatoires
Concentration de travail : La concentration de travail du conjugué dépend de l′application et du substrat.
Les concentrations suivantes sont données à titre indicatif :
Solution de travail : tampon TAE
0,04 M Tris-acétate, 0,001 M EDTA, pH 8,0
Solution d′HCl
0,25 M HCl
Pour une membrane de 200 cm2, environ 250 ml de solution sont nécessaires.
Solution de dénaturation
0,5 M NaOH, 1,5 M NaCl
Pour une membrane de 200 cm2, environ 500 ml de solution sont nécessaires.
Solution de neutralisation
0,5 M Tris-HCl, 3 M NaCl, pH 7,5
Pour une membrane de 200 cm2, environ 500 ml de solution sont nécessaires.
20x SSC
3 M NaCl, 0,3 M citrate de sodium, pH 7,0
2x SSC
Diluer le 20x SSC (Solution 5) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Granules DIG Easy Hyb
Reconstiter les granules (Flacon 8) dans 64 ml d′eau redistillée stérilisée à l′autoclave et incuber à 37 °C jusqu′à ce qu′elles soient complètement en solution. Préparer la solution plusieurs heures à l′avance.
Tampon de lavage rigoureux I
2x SSC, 0,1 % SDS
Tampon de lavage rigoureux II
0,2x SSC, 0,1 % SDS
Tampon de lavage, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de lavage, 10x (Flacon 10) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Solution de blocage, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de blocage, 10x (Flacon 12) 1:10 avec du tampon d′acide maléique, 1x (Solution 12).
Tampon d′acide maléique, 1×
Diluer un volume approprié de tampon d′acide maléique, 10x (Flacon 11) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Anti-DIG-AP, solution de travail
Pour réduire le bruit de fond provoqué par les agrégats d′anticorps, centrifuger le flacon pendant 5 min à 13 000 tr/min avant l′utilisation.
Diluer un volume approprié d′anti-DIG-AP (Flacon 13) avec la solution de blocage, 1x (Solution 11) à une concentration finale de 75 mU/ml (1:10 000).
Tampon de détection, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de détection, 10x (Flacon 14) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Conditions de stockage (solution de travail) : Tampon TAE :
Stable entre 15 et 25 °C
Solution d′HCl
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de dénaturation
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de neutralisation
Stable entre 15 et 25 °C
20x SSC
Stable entre 15 et 25 °C
2x SSC
Stable entre 15 et 25 °C
DIG Easy Hyb
Stable entre 15 et 25 °C pendant 3 mois
Tampon de lavage rigoureux I
Stable entre 15 et 25 °C
Tampon de lavage rigoureux II
Stable entre 15 et 25 °C
Tampon de lavage, 1x
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de blocage, 1x
Préparer juste avant l′utilisation. Ne pas stocker
Tampon d′acide maléique, 1×
Stable entre 15 et 25 °C
Anti-DIG-AP, solution de travail
Préparer juste avant l′utilisation. Ne pas stocker.
Tampon de détection, 1x
Stable entre 15 et 25 °C.
Les concentrations suivantes sont données à titre indicatif :
- Dot blot : 100 ng/ml
- ELISA : 100 ng/ml
- Western blot : 100 ng/ml
Solution de travail : tampon TAE
0,04 M Tris-acétate, 0,001 M EDTA, pH 8,0
Solution d′HCl
0,25 M HCl
Pour une membrane de 200 cm2, environ 250 ml de solution sont nécessaires.
Solution de dénaturation
0,5 M NaOH, 1,5 M NaCl
Pour une membrane de 200 cm2, environ 500 ml de solution sont nécessaires.
Solution de neutralisation
0,5 M Tris-HCl, 3 M NaCl, pH 7,5
Pour une membrane de 200 cm2, environ 500 ml de solution sont nécessaires.
20x SSC
3 M NaCl, 0,3 M citrate de sodium, pH 7,0
2x SSC
Diluer le 20x SSC (Solution 5) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Granules DIG Easy Hyb
Reconstiter les granules (Flacon 8) dans 64 ml d′eau redistillée stérilisée à l′autoclave et incuber à 37 °C jusqu′à ce qu′elles soient complètement en solution. Préparer la solution plusieurs heures à l′avance.
Tampon de lavage rigoureux I
2x SSC, 0,1 % SDS
Tampon de lavage rigoureux II
0,2x SSC, 0,1 % SDS
Tampon de lavage, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de lavage, 10x (Flacon 10) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Solution de blocage, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de blocage, 10x (Flacon 12) 1:10 avec du tampon d′acide maléique, 1x (Solution 12).
Tampon d′acide maléique, 1×
Diluer un volume approprié de tampon d′acide maléique, 10x (Flacon 11) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Anti-DIG-AP, solution de travail
Pour réduire le bruit de fond provoqué par les agrégats d′anticorps, centrifuger le flacon pendant 5 min à 13 000 tr/min avant l′utilisation.
Diluer un volume approprié d′anti-DIG-AP (Flacon 13) avec la solution de blocage, 1x (Solution 11) à une concentration finale de 75 mU/ml (1:10 000).
Tampon de détection, 1x
Diluer un volume approprié de tampon de détection, 10x (Flacon 14) 1:10 avec de l′eau redistillée stérilisée à l′autoclave.
Conditions de stockage (solution de travail) : Tampon TAE :
Stable entre 15 et 25 °C
Solution d′HCl
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de dénaturation
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de neutralisation
Stable entre 15 et 25 °C
20x SSC
Stable entre 15 et 25 °C
2x SSC
Stable entre 15 et 25 °C
DIG Easy Hyb
Stable entre 15 et 25 °C pendant 3 mois
Tampon de lavage rigoureux I
Stable entre 15 et 25 °C
Tampon de lavage rigoureux II
Stable entre 15 et 25 °C
Tampon de lavage, 1x
Stable entre 15 et 25 °C
Solution de blocage, 1x
Préparer juste avant l′utilisation. Ne pas stocker
Tampon d′acide maléique, 1×
Stable entre 15 et 25 °C
Anti-DIG-AP, solution de travail
Préparer juste avant l′utilisation. Ne pas stocker.
Tampon de détection, 1x
Stable entre 15 et 25 °C.
Autres remarques
Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Informations légales
Fabriqué sous licence de Geron Corporation.
TeloTAGGG is a trademark of Roche
Composants de kit seuls
Réf. du produit
Description
- Hinf I (30μl) 40U/μl
- Rsa I (30μl) 40U/μl
- Digestion Buffer 10x concentrated
- Water, nuclease-free
- Control DNA 150μl
- DIG Molecular Weight Marker 40 μl
- Loading Buffer 5x concentrated
- DIG Easy Hyb Granules
- Telomerase Probe
- Washing Buffer 10x concentrated
- Maleic Acid Buffer 10x concentrated
- Blocking Buffer 10x concentrated
- Anti-DIG-AP antibody
- Detection Buffer 10x concentrated
- Substrate Solution (CDP-Star) ready-to-use
Afficher tout (15)
Mention d'avertissement
Warning
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2
Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
does not flash
Point d'éclair (°C)
does not flash
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
Déjà en possession de ce produit ?
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