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Benzonase^® Nuclease HC

Purity > 99%, Effective Viscosity Reduction and Removal of Nucleic Acids from protein solutions

• Synonyme(s) : Endonucléase from Serratia marcescens
• Numéro CAS: 9025-65-4
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.1.30.2 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro MDL: MFCD00131010
• Code UNSPSC : 12352202
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• product name: Nucléase Benzonase^® HC, pureté > 99 %, Effective Viscosity Reduction and Removal of Nucleic Acids from protein solutions
• Source biologique: Serratia marcescens
• Niveau de qualité: 100
• Produit recombinant: expressed in E. coli
• Pureté: >99% (SDS-PAGE)
• Forme: buffered aqueous glycerol solution
• Fabricant/nom de marque: Novagen^®
• Conditions de stockage: OK to freeze
• Concentration: ≥250 units/μL
• Impuretés: <0.25 EU/kU Total endotoxin
• Application(s): research use
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

La nucléase Benzonase^® est une endonucléase génétiquement modifiée issue de Serratia marcescens. Elle dégrade toutes les formes d'ADN et d'ARN (simple brin, double brin, linéaire et circulaire) sans présenter la moindre activité protéolytique. Elle est efficace dans une multitude de conditions et possède une activité spécifique exceptionnellement élevée. Cette enzyme digère entièrement les acides nucléiques en oligonucléotides à extrémité 5′-monophosphate de 2 à 5 bases de long (en dessous du seuil d'hybridation), ce qui est idéal pour éliminer les acides nucléiques mélangés aux protéines recombinantes et permet de se conformer aux directives de la FDA concernant la contamination par les acides nucléiques. La capacité de la Benzonase à hydrolyser rapidement les acides nucléiques en fait l'enzyme de choix pour réduire la viscosité et ainsi abaisser le temps de traitement et accroître les rendements en protéine. Par exemple, cette enzyme est compatible avec les réactifs d'extraction protéique BugBuster et PopCulture et peut donc être ajoutée à ces derniers pour faire disparaître la viscosité et éliminer les acides nucléiques des extraits d'E. coli.

L'enzyme se compose de deux sous-unités de 30 kDa chacune. Elle est fonctionnelle entre pH 6 et pH 10 et entre 0 °C et 42 °C et son activation nécessite la présence de Mg²⁺ 1 à 2 mM. Elle est également active en présence de détergents ioniques et non ioniques, d'agents réducteurs, de PMSF (1 mM), d'EDTA (1 mM) et d'urée (l'activité relative dépend des conditions spécifiques). Son activité est inhibée par les cations monovalents > 150 mM, le phosphate > 100 mM, le sulfate d'ammonium > 100 mM et le chlorhydrate de guanidine > 100 mM.

La nucléase Benzonase est déclinée en deux qualités, ultrapure (> 99 % par SDS-PAGE) et pure (> 90 %), disponibles en concentration standard (25 à 29 U/µl) ou élevée (250 U/µl). Les deux préparations sont exemptes de protéases détectables et présentent une activité spécifique > 1 × 10⁶ U/mg de protéine. La qualité ultrapure (> 99 %) est testée pour confirmer l'absence d'endotoxines et contient < 0,25 EU/1 000 unités. Le produit est fourni sous la forme d'une solution filtrée à 0,2 µm dans du glycérol à 50 %. À conserver à -20 °C.

Endotoxines totales : < 0,25 EU/1 000 unités. Pureté : > 99 % par SDS-PAGE.

Application

Pour l'élimination des acides nucléiques présents dans les échantillons protéiques.

Actions biochimiques/physiologiques

Digère l′ADN et l′ARN endogènes ou dénaturés par voie thermique.

Avertissement

Toxicité : Manipulation standard (A)

Définition de l'unité

Une unité est définie comme la quantité d′enzyme provoquant un ΔA₂₆₀ de 1,0  en 30 minutes, ce qui correspond à la digestion complète de 37 µg d′ADN.

Informations légales

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 10 - Combustible liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 2