Technique ELISA
Généralement réalisés sur des plaques de microtitrage multipuits, les tests ELISA (de l'anglais "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay") sont des dosages de biologie moléculaire couramment utilisés pour la détection et la quantification de diverses molécules, notamment les peptides, les protéines et les anticorps. Ces tests permettent de détecter des molécules d'intérêt en concentrations de l'ordre du picogramme par millilitre et ils revêtent une importance cruciale pour les applications de la recherche fondamentale et de la recherche sur des maladies.
Technique ELISA : interactions anticorps/antigène
Les composants moléculaires clés d'un test ELISA incluent généralement un anticorps conjugué à une enzyme, une ou plusieurs molécules d'intérêt immobilisées et un substrat de détection. L'un des aspects déterminants de la réussite et de la qualité des données d'un test ELISA est l'affinité et la spécificité des interactions anticorps/antigène. Ces interactions antigène/anticorps sont influencées par de nombreux facteurs, dont le pH, la température et la force ionique.
Formats de détection des tests ELISA
Les tests ELISA qui utilisent des techniques de détection directe ont besoin d'un antigène immobilisé qui est lié à la surface d'une microplaque soit directement soit indirectement par l'intermédiaire d'un anticorps de capture, puis d'un anticorps primaire spécifique de l'antigène conjugué à une enzyme, et enfin d'un substrat de détection. Le format de détection indirecte plus couramment utilisé intègre un anticorps primaire non conjugué, suivi d'un anticorps secondaire conjugué qui est spécifique de la détection de l'anticorps primaire. La détection indirecte bénéficie d'une immunoréactivité accrue vis-à-vis de l'antigène cible, car l'enzyme conjuguée est uniquement présente sur l'anticorps secondaire. En plus des formats de détection directe et indirecte, il existe des tests de capture ou tests "en sandwich" qui utilisent d'abord un anticorps de capture d'antigène supplémentaire lié à la surface de la microplaque, suivi d'un anticorps primaire et d'un anticorps secondaire conjugué à une enzyme comme dans la technique indirecte décrite précédemment.
Articles techniques apparentés
- Conferma™ Sandwich ELISAs are created with a focus on their critical components. Combined with finished kit quality control analysis, explore Conferma™ ELISA validation that provides a high degree of consistency with each lot to give you confidence in your research.
- The inherent immune ability of an animal can be leveraged to generate antibodies that bind to specific molecules.
- The enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot ) assay enables visualization of multiple secretory products from a single responding cell. The ELISpot provides both qualitative (type of immune protein) and quantitative (number of responding cells) information.
- Review a high-throughput ELISA-based method to identify peptide substrates for class-specific and/or enzyme-specific Protein Tyrosine Kinases (PTKs) that can be utilized for the detection of kinase activity both in vivo and in vitro.
- Troubleshoot and optimize ELISAs using this guide that includes solutions to some of the most common sources of problems for assay development.
- Afficher tout (20)
Protocoles apparentés
- This article offers 4 popular ELISA protocols: Sandwich ELISA protocol, Phosphorylation Assay Procedure, EIA Assay Procedure, & Cell-based Assay Procedure.
- ELISA protocols providing detailed instructions on performing indirect ELISA and Capture ELISA . Learn more about recommended products and techniques for performing both sandwich ELISA and indirect ELISA experiments.
- Cell Proliferation ELISA, BrdU (colorimetric) Protocol & Troubleshooting
- Measure and compare the activity of proteases with this non-specific protease activity assay using casein. Use this assay as a standardized procedure to determine the activity of proteases for quality control.
- cAMP measurements are obtained using an ELISA assay (Harlow and Lane 1988). Commercial radio-immunoassays, or ELISA kits, to assay cAMP can be purchased from various manufacturers.
- Afficher tout (6)
Pour continuer à lire, veuillez vous connecter à votre compte ou en créer un.
Vous n'avez pas de compte ?