Cromatografia em camada fina
A cromatografia em camada fina (TLC) é um método com base em afinidade usado para separar os compostos em uma mistura. A TLC é um método de separação altamente versátil que é amplamente utilizado para análise qualitativa e quantitativa de amostras. A TLC pode ser usada para analisar praticamente qualquer classe de substância, incluindo pesticidas, esteroides, alcaloides, lipídios, nucleotídeos, glicosídeos, carboidratos e ácidos graxos.
Na TLC, a fase estacionária é uma camada fina de material adsorvente, geralmente gel de sílica ou óxido de alumínio, que reveste a superfície de uma placa inerte, em geral de vidro, plástico ou alumínio. A amostra é aplicada em uma extremidade da placa de TLC e colocada verticalmente em uma câmara fechada com um solvente orgânico (fase móvel). A fase móvel percorre o trajeto em direção ao topo da placa por forças capilares e os componentes da amostra migram distâncias variáveis com base em suas afinidades diferenciais pelas fases estacionária e móvel. Quando o solvente atinge a parte superior da placa, ela é removida da câmara de revelação e seca. Os componentes separados aparecem como pontos na placa e o fator de retenção (Rf) de cada componente é avaliado.
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Processos e princípios da TLC
A TLC se baseia no princípio da cromatografia clássica, em que os componentes da mistura são separados entre uma fase estacionária fixa e uma fase móvel líquida por afinidades diferenciais entre as duas fases.
Fator de retenção para TLC (Rf)
O fator de retenção (Rf) é usado para medir o movimento de compostos ao longo da placa de TLC. Rf é definido como a distância percorrida por um componente individual dividida pela distância total percorrida pelo solvente. Seu valor é sempre entre zero e um.
| Rf = | distância percorrida pelo componente |
| distância percorrida pelo solvente |
Em geral, quanto mais forte for a ligação de um componente ao adsorvente da fase estacionária, mais lentamente ele percorre o trajeto em direção ao topo da placa de TLC. Como os adsorventes de TLC são tipicamente polares, compostos não polares tendem a realizar o trajeto até o topo da placa mais rapidamente, resultando em valores de Rf maiores, enquanto os compostos polares tendem a se mover lentamente e têm valores de Rf menores.
Aplicações da TLC
A TLC é amplamente usada em diversos setores e áreas de pesquisa, inclusive farmacêuticos, testes clínicos, toxicologia ambiental, alimentar, análise de água e pesticidas, além de cosméticos. As aplicações típicas da TLC incluem:
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