Purificação de amostras
Vários métodos de purificação química e física podem ser aplicados para separar ou concentrar um analito-alvo antes da análise. Entre estes estão a absorção, adsorção, cromatografia, destilação, extração, troca iônica, filtração, formação de complexos, cristalização, secagem e muito mais. O preparo de amostras antes da análise ajuda a deixar a amostra em um formato que é compatível com a técnica analítica, reduz a complexidade da amostra, remove impurezas que causam interferência e concentra o analito antes da análise. O preparo adequado de amostras impede obstruções, pode reduzir a necessidade de procedimentos de lavagem rigorosos e pode prolongar a vida útil do meio cromatográfico.
Artigos técnicos relacionados
- Substances are said to be miscible in one another if they dissolve to form a uniform solution. Bookmark or download our miscibility table for common lab solvents.
- This page shows how to separate proteins and peptides with affinity for metal ions by immobilized metal chelate affinity chromatography using HiTrap Chelating HP, Chelating Sepharose Fast Flow,His MicroSpin Purification Module or HisTrap Kit from Cytiva.
- This page shows volatile and non-volatile buffer suggestions for anion and cation exchange chromatography.
- Ion exchange chromatography is employed by the Genopure Plasmid Midi Kit and the Genopure Plasmid Maxi Kit.
- This page describes the maintenance of media and storage conditions for multimodal chromatography using Cytiva products.
- Ver todos (36)
Protocolos relacionados
- This page shows how to convert between linear flow and volumetric flow rates in affinity chromatography.
- This page shows how to perform a separation with a Sephadex LH-20 column from Cytiva which are Size Exclusion Chromatography media of polysaccharide network made from cross-linked hydroxypropylated dextran beads.
- In this section the practical aspect of Reverse Phased Chromatography ( RPC) is discussed including media and column selection and eluent selection and preparation.
- Superose from Cytiva are Size Exclusion Chromatography media consisting of a composite base matrix of dextran and agarose. This page shows how to perform a separation with a superose column.
- The Amberlite™ XAD-4 resin used in Porozorb™ cartridges is a proven technology that is highly effective in removing various detergents from cell culture media for biopharmaceutical applications such as vaccine production.
- Ver todos (47)
Algumas das seguintes técnicas de purificação mais comuns são usadas no laboratório para preparar amostras para análise downstream.
Diálise
A diálise é uma técnica de purificação usada para remover sal ou outras moléculas de baixo peso molecular de uma amostra. Ela também é usada para trocar a composição do tampão de uma amostra. A diálise é uma técnica passiva que requer grandes volumes de tampão.
Troca de tampão e dessalinização
A dessalinização é um método simples para remover sais ou outros contaminantes de baixo peso molecular de uma amostra. Também é usada para troca de tampão antes ou depois de diferentes etapas cromatográficas e para a remoção rápida de reagentes para encerrar uma reação.
Precipitação fracionada
A precipitação fracionada é usada para remover impurezas macroscópicas de pequenos volumes de amostra. As técnicas de precipitação separam frações pelo princípio de solubilidade diferencial. Como as espécies de proteínas diferem em seu grau de hidrofobicidade, maiores concentrações de sal podem potencializar interações hidrofóbicas entre as proteínas e causar precipitação.
Extração
O preparo de amostras por extração envolve o isolamento de analitos-alvo de uma amostra complexa ou volume de amostra muito maior. O processo remove componentes da amostra que causam interferência que podem bloquear as colunas de HPLC e GC. Ela também aumenta a concentração de analito em um fator de 100 a 5.000, aumentando assim significativamente a sensibilidade de detecção. Como parte do preparo seletivo e específico de amostras, a extração ajuda a garantir uma análise cromatográfica mais confiável. Os tipos de extração são extração líquido-líquido, extração em fase sólida (SPE) e microextração em fase sólida (SPME).
Cromatografia de afinidade
A cromatografia de afinidade separa proteínas com base em interações reversíveis entre uma proteína e um ligante específico que foi acoplado a uma matriz cromatográfica. A técnica é altamente seletiva e permite purificação de proteínas de alta capacidade. A cromatografia de afinidade pode ser usada sempre que um ligante adequado estiver disponível para a proteína de interesse.
A purificação por cromatografia de afinidade envolve as etapas de captura e eluição. Na fase de captura, a proteína-alvo é ligada de modo específico e reversível a um ligante complementar que foi imobilizado em uma matriz cromatográfica. O objetivo é isolar, concentrar e estabilizar o produto-alvo, conservando sua potência e atividade. Após lavar a matriz para remover o material não ligado, a proteína-alvo ligada é recuperada modificando-se as condições para condições que favorecem a eluição. A eluição é realizada de forma específica, usando um ligante competitivo, ou de forma não específica, modificando o pH, a força iônica ou a polaridade. A eluição permite que a proteína-alvo seja coletada em uma forma purificada e concentrada.
Para continuar lendo, faça login ou crie uma conta.
Ainda não tem uma conta?