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Merck

A protocol for the production of recombinant spider silk-like proteins for artificial fiber spinning.

Nature protocols (2009-02-21)
Florence Teulé, Alyssa R Cooper, William A Furin, Daniela Bittencourt, Elibio L Rech, Amanda Brooks, Randolph V Lewis
RÉSUMÉ

The extreme strength and elasticity of spider silks originate from the modular nature of their repetitive proteins. To exploit such materials and mimic spider silks, comprehensive strategies to produce and spin recombinant fibrous proteins are necessary. This protocol describes silk gene design and cloning, protein expression in bacteria, recombinant protein purification and fiber formation. With an improved gene construction and cloning scheme, this technique is adaptable for the production of any repetitive fibrous proteins, and ensures the exact reproduction of native repeat sequences, analogs or chimeric versions. The proteins are solubilized in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) at 25-30% (wt/vol) for extrusion into fibers. This protocol, routinely used to spin single micrometer-size fibers from several recombinant silk-like proteins from different spider species, is a powerful tool to generate protein libraries with corresponding fibers for structure-function relationship investigations in protein-based biomaterials. This protocol may be completed in 40 d.

MATÉRIAUX
Référence du produit
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Description du produit

Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, ≥98%
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Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, pH 7, ≥98%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
TWEEN® 20, for molecular biology, viscous liquid
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Ammonium bicarbonate, ReagentPlus®, ≥99.0%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Acétate de potassium, ACS reagent, ≥99.0%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, fatty acid free, low endotoxin, lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, protease free, essentially globulin free, pH 7, ≥98%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
2-Propanol, meets USP testing specifications
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, protease free, pH 7, ≥98%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, cold ethanol fraction, pH 5.2, ≥96%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Ampicilline sodium salt, powder or crystals, BioReagent, suitable for cell culture
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, essentially fatty acid free, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
Référence
Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
TWEEN® 20, viscous liquid, suitable for cell culture
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, pH 5.2, ≥96%
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, suitable for RIA, pH 5.2, ≥96%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, lyophilized powder, essentially fatty acid free, ≥98% (agarose gel electrophoresis)
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Acétate de potassium, for molecular biology, ≥99.0%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, crystallized, ≥98.0% (GE)
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Disponibilité
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Quantité
Sigma-Aldrich
Alcool isopropylique, ≥99.7%, FCC, FG
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, essentially globulin free, ≥99% (agarose gel electrophoresis)
Référence
Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, low endotoxin, BioReagent, suitable for cell culture, ≥98% (agarose gel electrophoresis)
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, suitable for (for molecular biology), Non-acetylated
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
DNase I, Amplification Grade
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Acétate de potassium, ReagentPlus®, ≥99.0%
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, powder, BioXtra
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Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, lyophilized powder, essentially fatty acid free and essentially globulin free, ≥99% (agarose gel electrophoresis)
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Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, pH 5.2, ≥96%
Référence
Conditionnement
Disponibilité
Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Albumine de sérum bovin, heat shock fraction, protease free, suitable for hybridization, pH 7, ≥98%
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Quantité