Dünnschichtchromatographie
Test November 1, Teil 2
Die Dünnschichtchromatographie (TLC) ist eine auf Affinität basierende Methode zur Trennung von Verbindungen in einem Gemisch. Die TLC ist eine äußerst vielseitige Trennmethode, die sowohl für die qualitative als auch für die quantitative Analyse von Proben eingesetzt wird. Mit der TLC kann praktisch jede Substanzklasse analysiert werden, einschließlich Pestizide, Steroide, Alkaloide, Lipide, Nukleotide, Glykoside, Kohlenhydrate und Fettsäuren.
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Bei der TLC ist die stationäre Phase eine dünne Schicht aus adsorbierendem Material, in der Regel Kieselgel oder Aluminiumoxid, die auf eine inerte Plattenoberfläche (in der Regel Glas, Kunststoff oder Aluminium) aufgetragen wird. Die Probe wird auf ein Ende der TLC-Platte getupft und senkrecht in eine geschlossene Kammer mit einem organischen Lösungsmittel (mobile Phase) gestellt. Die mobile Phase wandert durch Kapillarkräfte die Platte hinauf, und die Probenbestandteile wandern je nach ihrer unterschiedlichen Affinität für die stationäre und die mobile Phase unterschiedlich weit. Wenn das Lösungsmittel den oberen Rand der Platte erreicht hat, wird die Platte aus der Entwicklungskammer genommen und getrocknet. Die getrennten Komponenten erscheinen als Flecken auf der Platte, und der Retentionsfaktor (Rf) jeder Komponente wird bestimmt.
TLC-Verfahren und Prinzipien
TLC basiert auf dem klassischen Chromatographie-Prinzip, bei dem Mischungskomponenten zwischen einer festen stationären Phase und einer flüssigen mobilen Phase durch unterschiedliche Affinitäten zwischen den beiden Phasen getrennt werden.
TLC-Retentionsfaktor (Rf)
Der Retentionsfaktor (Rf) wird verwendet, um die Bewegung von Verbindungen auf der TLC-Platte zu messen. Rf ist definiert als die von einer einzelnen Komponente zurückgelegte Strecke geteilt durch die vom Lösungsmittel zurückgelegte Gesamtstrecke. Sein Wert liegt immer zwischen null und eins.
| Rf = | Verfahrene Strecke pro Komponente |
| Weg durch das Lösungsmittel |
Im Allgemeinen gilt: Je stärker eine Verbindung an das Adsorptionsmittel der stationären Phase bindet, desto langsamer wandert sie auf der TLC-Platte. Da TLC-Adsorptionsmittel in der Regel polar sind, wandern unpolare Verbindungen tendenziell schneller die Platte hinauf, was zu höheren Rf-Werten führt, während polare Verbindungen eher langsam wandern und niedrigere Rf-Werte aufweisen.
Anwendungen der TLC
Die TLC wird in vielen Industriezweigen und Forschungsbereichen eingesetzt, z. B. in der Pharmazie, bei klinischen Tests, in der Umwelttoxikologie, bei der Analyse von Lebensmitteln, Wasser und Pestiziden sowie in der Kosmetik. Zu den typischen Anwendungen der TLC gehören:
- Analyse von Arzneimittelrückständen und Antibiotika in Lebensmitteln und Umweltproben
- Identifizierung und Quantifizierung von Farbstoffen, Inhaltsstoffen, Konservierungsmitteln und Süßungsmitteln in Lebensmitteln und kosmetischen Produkten
- Qualitätskontrolle und Reinheitsprüfung von pharmazeutischen Formulierungen
- Schnelles Screening mit hohem Durchsatz vor der HPLC
- Untersuchung chemischer Reaktionen auf Vollständigkeit
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