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Merck

Purifying Cytokinetic Cells from an Asynchronous Population.

Scientific reports (2015-08-12)
Einat Panet, Efrat Ozer, Tal Mashriki, Itay Lazar, Devora Itzkovich, Amit Tzur
RESUMEN

Cytokinesis is an intensively studied process by which the cell cytoplasm divides to produce two daughter cells. Like any other aspect of cell cycle research, the study of cytokinesis relies heavily on cell synchronization. However, the synchronization of cells during cytokinesis is challenging due to the rapid nature of this process and the shortage of cell cycle blocking agents specifically targeting this phase. Here, we demonstrate the use of standard flow cytometry for directly isolating cytokinetic cells from an asynchronous population of normally proliferating cells. This approach is based on a cell cycle marker whose temporal proteolysis, in combination with DNA quantification or cell size approximation, distinguishes cells undergoing cytokinesis. Furthermore, by avoiding doublet discrimination, typically used in flow cytometry analyses, we were able to further increase selectivity, specifically purifying cells at late cytokinesis. Our method circumvents checkpoint activation, cell cycle arrest, and any other means of pre-synchronization. These qualities, as demonstrated for both unattached and adherent cells, enable high selectivity for cytokinetic cells despite their overall low abundance in an asynchronous population. The sorted cells can then be readily used for cell biological, biochemical, and genomic applications to facilitate cytokinesis and cell cycle research.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, powder, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
L-Glutamina, meets USP testing specifications, suitable for cell culture, 99.0-101.0%, from non-animal source
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Sigma-Aldrich
Yoduro de propidio, ≥94.0% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Dextrosa, 97.5-102.0% anhydrous basis, meets EP, BP, JP, USP testing specifications
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Sigma-Aldrich
L-Glutamina, ReagentPlus®, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, ≥99.5% (GC), BioXtra
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Sigma-Aldrich
Nocodazole, ≥99% (TLC), powder
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SAFC
L-Glutamina
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Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, BioUltra, anhydrous, ≥99.5% (sum of enantiomers, HPLC)
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Sigma-Aldrich
Ácido acético, for luminescence, BioUltra, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Ácido acético, ≥99.5%, FCC, FG
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Sigma-Aldrich
Ácido acético, natural, ≥99.5%, FG
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Sigma-Aldrich
L-Glutamina, BioUltra, ≥99.5% (NT)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, suitable for mouse embryo cell culture, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, Hybri-Max, powder, BioReagent, suitable for hybridoma
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, ACS reagent
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Sigma-Aldrich
L-Glutamina
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Cantidad
Sigma-Aldrich
L-Glutamina, γ-irradiated, BioXtra, suitable for cell culture
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Propidium iodide solution
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Cantidad
Sigma-Aldrich
D-(+)-Glucosa, 99.9 atom % 16O, 99.9 atom % 12C
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetic acid-12C2, 99.9 atom % 12C
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