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Merck

Large cargo transport by nuclear pores: implications for the spatial organization of FG-nucleoporins.

The EMBO journal (2013-11-12)
Li-Chun Tu, Guo Fu, Anton Zilman, Siegfried M Musser
RESUMEN

Nuclear pore complexes (NPCs) mediate cargo traffic between the nucleus and the cytoplasm of eukaryotic cells. Nuclear transport receptors (NTRs) carry cargos through NPCs by transiently binding to phenylalanine-glycine (FG) repeats on intrinsically disordered polypeptides decorating the NPCs. Major impediments to understand the transport mechanism are the thousands of FG binding sites on each NPC, whose spatial distribution is unknown, and multiple binding sites per NTR, which leads to multivalent interactions. Using single molecule fluorescence microscopy, we show that multiple NTR molecules are required for efficient transport of a large cargo, while a single NTR promotes binding to the NPC but not transport. Particle trajectories and theoretical modelling reveal a crucial role for multivalent NTR interactions with the FG network and indicate a non-uniform FG repeat distribution. A quantitative model is developed wherein the cytoplasmic side of the pore is characterized by a low effective concentration of free FG repeats and a weak FG-NTR affinity, and the centrally located dense permeability barrier is overcome by multivalent interactions, which provide the affinity necessary to permeate the barrier.

MATERIALES
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Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Glicina, ReagentPlus®, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Glicina, suitable for electrophoresis, ≥99%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, BioUltra, for molecular biology, ≥99.0% (NT)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, from non-animal source, meets EP, JP, USP testing specifications, suitable for cell culture, ≥98.5%
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Sigma-Aldrich
L-Phenylalanine, from non-animal source, meets EP, JP, USP testing specifications, suitable for cell culture, 98.5-101.0%
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SAFC
Glicina
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Sigma-Aldrich
Glycine hydrochloride, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
β-Galactosidase from Aspergillus oryzae, ≥8.0 units/mg solid
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Sigma-Aldrich
β-Galactosidasa from Escherichia coli, Grade VIII, lyophilized powder, ≥500 units/mg protein
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
β-Galactosidasa from Escherichia coli, lyophilized powder, ≥500 units/mg protein
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
L-Phenylalanine, BioUltra, ≥99.0% (NT)
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Sigma-Aldrich
Glicina, BioXtra, ≥99% (titration)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
β-Galactosidasa from Escherichia coli, Grade VI, lyophilized powder, ≥250 units/mg protein
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glycine 1 M solution
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Sigma-Aldrich
β-Galactosidasa from Escherichia coli, aqueous glycerol suspension, ≥500 units/mg protein (biuret)
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Sigma-Aldrich
Glicina, 99%, FCC
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Sigma-Aldrich
L-Phenylalanine, reagent grade, ≥98%
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Sigma-Aldrich
β-Galactosidasa from Escherichia coli, suitable for enzyme immunoassay, lyophilized, powder, ~140 U/mg
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Sigma-Aldrich
L-Phenylalanine, 99%, FCC
Número de referencia del producto (SKU)
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Sigma-Aldrich
Glicina, ACS reagent, ≥98.5%
Número de referencia del producto (SKU)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
β-Galactosidase from bovine liver, Grade III, lyophilized powder, ≥0.15 units/mg protein
Número de referencia del producto (SKU)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicina, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, 99-101% (based on anhydrous substance)
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Supelco
L-Phenylalanine, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
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Supelco
Glicina, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
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Supelco
Glicina, analytical standard, for nitrogen determination according to Kjeldahl method
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Sigma-Aldrich
β-Galactosidase from bovine testes, ammonium sulfate suspension, 1.0-3.0 units/mg protein (modified Warburg-Christian)
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Sigma-Aldrich
Glicina, puriss. p.a., reag. Ph. Eur., buffer substance, 99.7-101% (calc. to the dried substance)
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Supelco
Glicina, certified reference material, TraceCERT®, Manufactured by: Sigma-Aldrich Production GmbH, Switzerland
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Supelco
Glycine hydrochloride solution, 100 mM amino acid in 0.1 M HCl, analytical standard
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Supelco
L-Phenylalanine, certified reference material, TraceCERT®, Manufactured by: Sigma-Aldrich Production GmbH, Switzerland
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