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Mezcla de genotipado KAPA2G Fast de inicio en caliente

with dye

• Sinónimos: PCR, genotipado
• UNSPSC Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Propiedades

• Quality Level: 100
• usage: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• shelf life: ≤18 mo.
• feature: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• packaging: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5620); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5621)
• manufacturer/tradename: Roche
• technique(s): PCR: suitable; genotyping: suitable
• input: crude DNA
• storage temp.: −20°C

Descripción

General description

Los kits para genotipado de ratón KAPA2G Fast HotStart^® contienen KAPA Express Extract, un sistema nuevo de tampón y proteasa termoestable que permite la extracción del ADN listo para PCR del tejido de ratón en tan sólo 15 minutos, y la mezcla para genotipado KAPA2G Fast con colorante, que contiene una ADN polimerasa biotecnológica obtenida mediante evolución directa para gran procesividad y velocidad extrema. La combinación de KAPA Express Extract y mezcla para genotipado KAPA2G Fast permite la extracción y la amplificación fiables de fragmentos de ADN de tejido de ratón en tan sólo 1 hora, en comparación con el ≥1 día observado con los protocolos convencionales. La mezcla para genopitado KAPA2G Fast (2X) es una mezcla maestra lista para usar que contiene todos los componentes para la PCR rápida con estabilizadores y dos colorantes inertes, excepto cebadores y plantillas.

Application

La mezcla para genotipado KAPA2G Fast HotStart^® se ha utilizado en:

• Extracción de ADN genómico y en la preparación de mezclas maestras para PCR
• Extracción y amplificación del tejido de la cola, la oreja o el dedo del pie de ratón.
• Extracción y amplificación del ADN de otros tejidos animales

Biochem/physiol Actions

Los fragmentos de ADN generados con la mezcla de genotipado KAPA2G Fast tienen una cola de 3′-dA y clonarse en vectores de clonación TA, o utilizarse para análisis o aplicaciones habituales posteriores, como la digestión con enzimas de restricción, la clonación y la secuenciación. Igual que la Taq natural, la KAPA2G Fast tiene actividades 5′→3′ polimerasa′ y 5′→3′ exonucleasa, pero no actividad 3′→5′ exonucleasa (corrección de errores). La fidelidad de la KAPA2G Fast es similar a la de la Taq natural; tiene una tasa de error de aproximadamente 1 error por cada 1,7 x 10⁵ nucleótidos incorporados. A diferencia de los protocolos existentes que se basan en la digestión con proteinasa K, las extracciones en las que se utiliza KAPA Express Extract se realizan cómodamente en un solo tubo, sin necesidad de productos químicos peligrosos ni varios pasos de lavado.

Features and Benefits

Mayor rendimiento, tiempo de respuesta y fiabilidad:

• ADN listo para PCR generado en tan sólo 15 minutos
• Mínima manipulación, lo que reduce el riesgo de pérdida o contaminación de la muestra
• Plantilla suficiente para múltiples ensayos; fácil escalado para manipular muestras en un formato de 96
• Amplificación rápida y fiable de fragmentos de ADN a través de una amplia variedad de contenidos de GC y longitudes de amplicón

Supera los métodos de extracción en crudo y los kits comerciales:

• Tiempos de respuesta mayores
• Mayor especificidad
• Menor coste

Notas rápidas:

• Extracto de ADN listo para PCR del tejido de la cola, la oreja o el dedo del pie de ratón en 15 minutos
• Diluya 10 veces el extracto de ADN antes de la PCR en Tris-HCl 10 mM (pH 8,0 - 8,5) y utilice 1 μl del ADN por cada 25 μl de reacción.
• Los extractos son estables a -20°C durante >6 meses.
• La mezcla de genotipado KAPA2G Fast (inicio en caliente) contiene la ADN polimerasa KAPA2G Fast genotecnológica para PCR rápida, junto con tampón, MgCl₂ (1,5 mM a 1X) y los dNTP (0,2 mM cada uno X1).
• En la mezcla de genotipado KAPA2G Fast se incluye un colorante de carga para electroforesis, que permite la cómoda carga directa de los productos de la PCR en geles de agarosa para análisis.
• Utilice un tiempo de hibridación de 15 segundos, con un tiempo de extensión de 15 segundos para amplicones <1 kb, o extensión de 15-30 segundos/kb para amplicones más largos.

Packaging

• Patrón KAPA2G Fast 2X o mezcla de genotipado HotStart con colorante

En hielo seco. En algunos casos, sin embargo, las condiciones de envío pueden variar en ciertas regiones.

Quality

Todos los componentes de los kits genotipado de ratón KAPA2G Fast de inicio en caliente están sometidos a estrictas pruebas de control de calidad, carecen de actividades exonucleasa y endonucleasa contaminantes y cumplen estrictos requisitos con respecto a los niveles de contaminación del ADN.

Preparation Note

Asegurarse siempre de que el producto se ha descongelado por completo y se ha mezclado bien antes de su uso. Los reactivos pueden conservarse a 4°C durante poco tiempo (hasta 1 mes). Para un almacenamiento prolongado, retornar a -20°C. Siempre que todos los componentes se hayan manipulado con cuidado y no se hayan contaminado, no cabe esperar que el kit se altere si se deja (accidentalmente) a temperatura ambiente un breve espacio de tiempo (hasta 3 días).

Other Notes

Para uso exclusivo en investigación. No indicado para procedimientos diagnósticos.

Legal Information

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Información de seguridad

• pictograms: GHS08
• signalword: Warning
• hcodes: H371
• pcodes: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Hazard Classifications: STOT SE 2
• Storage Class: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk_germany: WGK 1
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