12156792910
Roche
Kit de detección de muerte celular in situ,TMR rojo
sufficient for ≤50 tests
Sinónimos:
rojo, tm, kit de detección de muerte celular in situ, tm rojo, kit de detección de muerte celular in situ
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About This Item
UNSPSC Code:
12352200
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usage
sufficient for ≤50 tests
Quality Level
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
flow cytometry: suitable
storage temp.
−20°C
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General description
Kit para la detección y la cuantificación de la muerte celular apoptótica en células individuales mediante citometría de flujo y microscopia de fluorescencia, y para el marcaje doble con marcadores celulares etiquetados con fluoresceína (TMR rojo).
Los métodos habitualmente utilizados para determinar la apoptosis consisten en el análisis del ADN genómico mediante electroforesis en gel de agarosa y los ensayos de fragmentación del ADN basados en la 3H-timidina y, alternativamente, la 5-bromo-2′-desoxiuridina. Los métodos consisten en separación de ADN fragmentado de bajo peso molecular del ADN no fragmentado de elevado peso molecular en una población celular dada. Por tanto, estos métodos no proporcionan información sobre el destino de una célula concreta de una población celular dada o, en particular, en cortes de tejido. Por otro lado, las células apoptóticas individuales pueden ser reconocidas microscópicamente por el aspecto característico de la condensación y la fragmentación de la cromatina nuclear, pero este método es subjetivo y está limitado a un margen temporal relativamente estrecho cuando los cambios morfológicos están en su máximo.
El signo patognomónico de la apoptosis es la degradación del ADN, que en las primeras etapas es selectiva para las regiones conectoras internucleosómicas del ADN. La escisión del ADN puede producir roturas (muescas) monocatenarias o bicatenarias del ADN. Ambos tipos de roturas pueden detectarse marcando los extremos 3′-OH terminales libres con nucleótidos modificados (por ejemplo, biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) en una reacción enzimática. La enzima dexosinucleotidil transferasa terminal (TdT) cataliza la polimerización independiente de molde de los desoxirribonucleótidos al extremo 3′ del ADN monocatenario o bicatenario. Este método se ha denominado también TUNEL (del inglés TdT-mediated dUTP-X nick end labeling: marcaje del extremo de la muesca con dUTP-X mediado por la TdT). También pueden marcarse los grupos 3′-OH libres utilizando ADN polimerasas mediante el mecanismo dependiente de molde denominado traducción de muesca. Sin embargo, se considera que el método TUNEL es más sensible y rápido.
Material de muestra: Células en suspensión, de cytospin y preparaciones de frotis celulares, células adherentes cultivadas en portaobjetos y cortes de tejido congelado e incluido en parafina.
Principio
El kit para detección de muerte celular in situ, TMR rojo, se basa en la detección de roturas en el ADN monocatenario y bicatenario que se producen en las primeras etapas de la apoptosis.
Las células apoptóticas están fijas y permeabilizadas. Después, las células se incuban con la mezcla de reacción TUNEL que contiene TdT y TMR-dUTP. Durante este periodo de incubación, la TdT cataliza la adición de TMR-dUTP a los grupos 3′-OH libres en el ADN monocatenario y bicatenario. Después de lavar, se visualiza mediante citometría de flujo o microscopia de fluorescencia el marcaje incorporado en los sitios dañados del ADN.
El signo patognomónico de la apoptosis es la degradación del ADN, que en las primeras etapas es selectiva para las regiones conectoras internucleosómicas del ADN. La escisión del ADN puede producir roturas (muescas) monocatenarias o bicatenarias del ADN. Ambos tipos de roturas pueden detectarse marcando los extremos 3′-OH terminales libres con nucleótidos modificados (por ejemplo, biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceína-dUTP) en una reacción enzimática. La enzima dexosinucleotidil transferasa terminal (TdT) cataliza la polimerización independiente de molde de los desoxirribonucleótidos al extremo 3′ del ADN monocatenario o bicatenario. Este método se ha denominado también TUNEL (del inglés TdT-mediated dUTP-X nick end labeling: marcaje del extremo de la muesca con dUTP-X mediado por la TdT). También pueden marcarse los grupos 3′-OH libres utilizando ADN polimerasas mediante el mecanismo dependiente de molde denominado traducción de muesca. Sin embargo, se considera que el método TUNEL es más sensible y rápido.
Material de muestra: Células en suspensión, de cytospin y preparaciones de frotis celulares, células adherentes cultivadas en portaobjetos y cortes de tejido congelado e incluido en parafina.
Principio
El kit para detección de muerte celular in situ, TMR rojo, se basa en la detección de roturas en el ADN monocatenario y bicatenario que se producen en las primeras etapas de la apoptosis.
Las células apoptóticas están fijas y permeabilizadas. Después, las células se incuban con la mezcla de reacción TUNEL que contiene TdT y TMR-dUTP. Durante este periodo de incubación, la TdT cataliza la adición de TMR-dUTP a los grupos 3′-OH libres en el ADN monocatenario y bicatenario. Después de lavar, se visualiza mediante citometría de flujo o microscopia de fluorescencia el marcaje incorporado en los sitios dañados del ADN.
Specificity
La reacción del método TUNEL marca de preferencia las roturas de la hebra de ADN generadas durante la apoptosis. Esto permite discriminar entre apoptosis y necrosis, y entre roturas de la hebra de ADN principal inducidas por citostáticos o irradiación.
Application
El kit de detección de muerte celular in situ, TMR rojo, se ha utilizado en el análisis del marcaje de extremos mellados con biotina-dUTP mediado por la desoxinucleotidil transferasa terminal (TUNEL). Se ha utilizado en análisis de detección de apoptosis.
Técnica precisa, rápida y sencilla para detectar y cuantificar la fragmentación del ADN apoptótico en células individuales en células y tejidos con un marcaje fluorescente rojo para microscopia de fluorescencia y citometría de flujo.
Packaging
1 kit que contiene 2 componentes.
Preparation Note
Concentración de trabajo: Concentración enzimática
La concentración óptima de la enzima oscila entre 0,5 y 5 U por ensayo. Para una PCR convencional de 50 μ, recomendamos utilizar 2 U de la mezcla enzimática.
Disolución de trabajo: Añada el volumen total (50 μl) de la disolución enzimática a los 450 μl remanentes de la disolución de marcaje para obtener 500 μl de la mezcla de reacción TUNEL.
Mezcle bien para equilibrar los componentes.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): La mezcla de reacción TUNEL debe prepararse inmediatamente antes de su uso y no debe conservarse. Mantenga la mezcla de reacción TUNEL en hielo hasta su uso.
La concentración óptima de la enzima oscila entre 0,5 y 5 U por ensayo. Para una PCR convencional de 50 μ, recomendamos utilizar 2 U de la mezcla enzimática.
Disolución de trabajo: Añada el volumen total (50 μl) de la disolución enzimática a los 450 μl remanentes de la disolución de marcaje para obtener 500 μl de la mezcla de reacción TUNEL.
Mezcle bien para equilibrar los componentes.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): La mezcla de reacción TUNEL debe prepararse inmediatamente antes de su uso y no debe conservarse. Mantenga la mezcla de reacción TUNEL en hielo hasta su uso.
La mezcla de reacción TUNEL se prepara mezclando la disolución enzimática y la disolución de marcaje antes de su uso.
Solo componentes del kit
Referencia del producto
Descripción
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (TMR-dUTP)
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Storage Class
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
wgk_germany
WGK 3
flash_point_f
does not flash
flash_point_c
does not flash
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