蛋白質譜儀
蛋白質譜法廣泛應用於生物標誌物的發現、蛋白質組學研究和臨床應用的生物樣本分析。與其他用於大規模表征蛋白質的技術相比，質譜技術因其易於進行複雜分析而成為蛋白質組學的主要工具。
質譜技術可用於根據蛋白質的結構、轉譯後修飾和相互作用來定量識別和表征蛋白質。
- 蛋白質辨識 通常包括將蛋白質化學或酵素消化成肽段，然後進行質譜分析，並使用計算方法或測序進行識別。
- 轉譯後修飾 可透過氨基酸殘基質量的變化進行識別。
- 對於糖分析和剖析，使用酶或化學方法從糖蛋白中釋放糖分子，然後對釋放的糖進行衍生化，以進行質譜分析。
- 蛋白互作是透過特定目標蛋白與任何互作蛋白的親和共純化來確定，或在使用質譜分析之前，使用尺寸排除或離子交換色譜法進行更全面的研究。
對於定量蛋白質組學，蛋白質或肽可以使用串聯質量標記 (TMT) 和 iTRAQ 用穩定同位素進行化學標記，或通過納入標記氨基酸 (SILAC) 進行代謝。比較重同位素和輕同位素的納入，可將質量標記峰強度與蛋白質豐度相關聯，從而進行相對定量。若要進行絕對定量，可在樣品中添加同位素標記的合成肽或蛋白質標準，進行選擇反應監測 (SRM) 分析
在蛋白質質譜法中，不同蛋白質和肽的質量是透過測量其氣相離子的 m/z（質量-電荷）比來確定的。質譜儀首先使用離子源將蛋白質分子轉換為氣相離子。接著，質量分析器會根據 m/z 比率來分離離子化的分析物質。接著，偵測器會記錄每個 m/z 值的離子數量。MALDI 和電漿離子化 (ESI) 常用於離子多肽或蛋白質。
MALDI-TOF Mass Spectrometry
MALDI是一種利用雷射能量吸收基質產生離子的離子化方法，可將蛋白質分子的碎片減至最少。首先將樣品與適當的基質材料混合。接著，脈衝雷射照射樣本，引發樣本與基質材料的消融與解吸。之後，分析物分子會在消融的氣體中透過質子化或去質子化的方式離子化，然後再以質譜法進行分析。
Electrospray Ionization Mass Spectrometry
電噴離子質譜法電噴離(ESI)是利用電噴的方式產生離子，在電噴的過程中，高電壓會加在液體樣品上產生氣溶膠，產生的離子對於縮氨酸和蛋白質的碎裂最小。當質譜與液相色譜 (LC-MS) 耦合時，通常會使用電噴電離，因為液相色譜洗提液可以直接送入電噴進行串聯處理。
工作流程
消化與標示
位點特異性蛋白酶（如胰蛋白酶）用來將蛋白質裂解成小片段，以便通過將實驗光譜與蛋白質資料庫中的理論光譜進行比對或與運行標準進行比較來進行鑒定。為了進行相對定量，可使用氨基酸餵養所納入的穩定同位素對細胞培養物進行代謝標記，或使用化學方法對樣本進行穩定同位素標記。使用同位素標記的合成縮氨酸加標樣本，可透過選擇反應監測 (SRM) 分析進行絕對定量。
蛋白質質量標定的校準和標準化
校正標準可作為樣品分析的對照，用於確定蛋白質特性、實驗靈敏度、消化效率，並幫助色譜分離和定量分析。
色譜分離
色譜法可將蛋白質與縮氨酸分離成更容易處理的樣品進行分析。由於多種不同的縮氨酸可能具有相似的質量，因此 HPLC 常用於防止質量非常相似或相同的縮氨酸同時加入質譜儀，從而增加測量的整體動態範圍。
偵測與分析
蛋白質和肽在檢測和分析前會先經由 MALDI 或 ESI 離子化。質量分析儀會根據離子的 m/z 值區分離子。由此產生的碎片模式可用於鑑定，樣品可透過評估同位素標籤區分的樣品的峰強度比率進行相對定量，或使用標籤內標的 SRM 分析進行絕對定量。
相關文章
- Learn more about Mass Spectrometry or MS including what it is, what it is used for and how it works.
- Absolute Quantification (Protein-AQUA™™) is a targeted quantitative proteomics technique that exhibits robust efficacy and is being increasingly utilized for a wide variety of quantitative proteomics studies.
- Utilize the protein AQUA™ technique to measure expression of silenced genes, quantitate protein levels for low abundance serum proteins and analyze phosphorylated peptides enriched with immobilized metal affinity chromatography.
- Standardize Your Research. We offer both the Universal Proteomics Standard and the Proteomics Dynamic range Standard as complex, well-defined, well characterized reference standards for mass spectrometry.
- In this study, we developed a rapid trypsin digest kit that, at elevated temperatures, yielded reliable, reproducible results in less than 2 hours on a wide variety of substrates for mass spectrometry.
- 查看全部 (18)
相關通訊協定
- Dr. Alan Robertson and Dr. Ben Davis at Vernalis, Ltd., UK, a provider of drug discovery and development services, have refined a novel protocol for the duallabelling of proteins using EnPresso® B Defined Nitrogen-free.
- SigmaMab Antibody Drug Conjugate Mimic, is a non-toxic drug mimic utilized as a standard for mass spectrometry and high performance liquid chromatography.
- solution, 2 μg/mL in acetonitrile, analytical standard
- The development of modern mass spectrometry (MS) equipment with high resolution and mass accuracy has led to its use in analyzing glycans for both profiling and structural studies.
- Biomarkers play an essential role in the drug discovery and development process.
- 查看全部 (11)
尋找更多文章和協議
How Can We Help
若有任何問題，請提交客戶支援請求
或與我們的客戶服務團隊討論：
電子郵件custserv@sial.com
或致電 +1 (800) 244-1173
額外支援
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- 计算器与应用
网络工具箱 - 用于分析化学、生命科学、化学合成和材料科学的科学研究工具和资源。
- Customer Support Request
Customer support including help with orders, products, accounts, and website technical issues.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
若要繼續閱讀，請登入或建立帳戶。
還沒有帳戶？