免疫检测试剂和底物

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实验方案：蛋白质印迹指南
手册: 重新思考一下蛋白印迹法
文章: Western Blotting实验方法（免疫印迹实验方法）

阻断剂

阻断未结合的膜位点可避免抗体非特异性结合，防止高背景。传统的牛奶、明胶和其他基于蛋白质的阻断剂适用于许多印迹应用，但可能屏蔽信号或干扰特定蛋白质靶标检测，导致灵敏度或检出率下降。Immobilon^®阻断降噪试剂包含经过充分优化的无蛋白即用型缓冲液，可降低化学发光、荧光或磷蛋白检测应用的背景水平。

链霉亲和素和二抗偶联物

现代化的免疫检测方法基于酶联检测，使用与辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等酶共价结合的偶联酶的链霉亲和素和二抗。偶联的酶可催化特定底物降解，产生信号。现有多种链霉亲和素、蛋白A、蛋白G和二抗偶联物可供蛋白质免疫印迹使用。我们提供大量HRP和AP底物选择，用于蛋白印迹法中的化学发光、显色和比色检测。

用于蛋白质印迹中的化学发光底物

Immobilon^® 化学发光检测用HRP底物针对更多定量印迹提高了灵敏度，且通过降低检测用抗体的浓度降低了成本。根据不同灵敏度，在一系列Immobilon®便捷即用型或两种组分形式底物中进行选择 ，以优化用于蛋白质印迹应用的检测。

• Immobilon^®Classico、Crescendo和Forte化学发光底物 包含一系列预混即用型过氧化物酶检测试剂，并提供了多种灵敏度选择，可在一系列目标蛋白浓度范围内提供理想的信噪比。检测限制
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg 目标蛋白
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg 目标蛋白
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg 目标蛋白
    
• Immobilon^® ECL Ultra和Western化学发光HRP底物以标准的双组份形式提供，具有出色的灵敏度和长信号持续时间。这类制剂支持使用更多种类的稀释一抗溶液进行免疫印迹检测。检测限制
  • Immobilon^® Western HRP底物: ~ 400 & 目标蛋白
  • Immobilon^® ECL Ultra 底物:低飞克范围

Cytiva™ Amersham™ ECL检测试剂采用增强型鲁米诺HRP检测，使用不同配方来覆盖不同的蛋白质印迹应用的需要。

• Cytiva Amersham™ ECL蛋白质印迹试剂推荐用于验证性的蛋白质印迹应用。
• Cytiva Amersham™ ECL Prime蛋白质印迹检测试剂可在同一次印迹中同时检测高丰度和低丰度蛋白质。
• Cytiva Amersham™ ECL Select蛋白质印迹检测试剂即使使用稀释的一级和二级抗体也具有很高的灵敏度。
• Cytiva Amersham™ ECL Start蛋白印迹检测试剂用于中、高表达蛋白的化学发光检测。

用于蛋白质印迹中的显色底物

显色检测利用过氧化物酶（如，HRP）或碱性磷酸酶（AP）结合酶来催化不溶性有色沉淀物的沉积反应，用以进行检测。我们的蛋白质印迹显色底物有溶液、粉末和片剂三种形式，为储存和使用提供了灵活的选择。

• SIGMAFAST™ DAB片剂（显色HRP底物）由比色沉淀底物组成，与辣根过氧化物酶反应时呈褐色，可水溶制备即用型印迹检测缓冲溶液。
• BCIP/NBT（蓝色/紫色）和BCIP/TNBT（蓝色/棕色）单一组分试剂（显色AP底物）是碱性磷酸酶的高灵敏度比色底物。
• TMB增强型单组分HRP膜底物（显色HRP底物）是一种比色底物，可形成深蓝色产物。

信号增强剂

• Immobilon^® 信号增强剂适用于信号强度较低的蛋白质免疫印迹应用。通过增强抗体-抗原反应，可使信号强度增加2到10倍。Immobilon^®信号增强剂兼容PVDF和硝酸纤维素膜，适用于比色、化学发光和荧光检测方法。
• SignalBoost™免疫反应增强剂试剂盒可增强硝酸纤维素或PVDF膜上的化学发光或比色靶标信号

用于抗体剥离和重新检测的试剂和试剂盒

专为从蛋白质免疫上快速有效去除抗体而设计的抗体剥离和重新结合试剂，不会对固定蛋白质产生任何明显影响。