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The ZGRF1 Helicase Promotes Recombinational Repair of Replication-Blocking DNA Damage in Human Cells.

Cell reports (2020-07-09)
André Brannvoll, Xiaoyu Xue, Youngho Kwon, Smaragdi Kompocholi, Anne Katrine W Simonsen, Keerthana S Viswalingam, Leticia Gonzalez, Ian D Hickson, Vibe H Oestergaard, Hocine W Mankouri, Patrick Sung, Michael Lisby
RESUMEN

Replication-blocking DNA lesions are particularly toxic to proliferating cells because they can lead to chromosome mis-segregation if not repaired prior to mitosis. In this study, we report that ZGRF1 null cells accumulate chromosome aberrations following replication perturbation and show sensitivity to two potent replication-blocking anticancer drugs: mitomycin C and camptothecin. Moreover, ZGRF1 null cells are defective in catalyzing DNA damage-induced sister chromatid exchange despite accumulating excessive FANCD2, RAD51, and γ-H2AX foci upon induction of interstrand DNA crosslinks. Consistent with a direct role in promoting recombinational DNA repair, we show that ZGRF1 is a 5'-to-3' helicase that catalyzes D-loop dissociation and Holliday junction branch migration. Moreover, ZGRF1 physically interacts with RAD51 and stimulates strand exchange catalyzed by RAD51-RAD54. On the basis of these data, we propose that ZGRF1 promotes repair of replication-blocking DNA lesions through stimulation of homologous recombination.

MATERIALES
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Sigma-Aldrich
Triton X-100, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Sonda para PLA® in situ Duolink® anti-conejo PLUS, Affinity purified Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)
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Sigma-Aldrich
Sonda para PLA® in situ Duolink® anti-ratón MINUS, Affinity purified Donkey anti-Mouse IgG (H+L)
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Sigma-Aldrich
DPX Mountant for histology, slide mounting medium
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Sigma-Aldrich
ANTI-FLAG® M2-Peroxidasa (HRP) monoclonal antibody produced in mouse, clone M2, purified immunoglobulin, buffered aqueous glycerol solution
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Sigma-Aldrich
5-Bromo-2′-desoxiuridina, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Timidina, powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Duolink® In Situ Detection Reagents Orange
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Sigma-Aldrich
Hydroxyurea, 98%, powder
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Roche
Anti-GFP, from mouse IgG1κ (clones 7.1 and 13.1)
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Sigma-Aldrich
Mitomicina C from Streptomyces caespitosus, ≥98% (HPLC), potency: ≥970 μg per mg (USP XXIV), γ-irradiated, suitable for cell culture
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Roche
Anti-HA-Peroxidase, High Affinity, from rat IgG1
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Sigma-Aldrich
Triton X-100, laboratory grade
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Sigma-Aldrich
IgG anti-conejo (molécula completa)-Peroxidasa antibody produced in goat, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution
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Sigma-Aldrich
Piperazine, ReagentPlus®, 99%
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Sigma-Aldrich
Magnesium methyl carbonate solution, 2.0 M in DMF
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Sigma-Aldrich
Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, ≥99% (TLC)
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Sigma-Aldrich
bisBenzimide H 33258, ≥98% (HPLC and TLC)
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Sigma-Aldrich
Ureidosuccinic acid, 98.0-102.0% (T)
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Sigma-Aldrich
8-Cyclopentyl-1,3-dimethylxanthine, ≥98% (HPLC), powder
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