Reactivos para disociación celular
Para replicar sus entornos nativos, los fenotipos de células adherentes (como las células epiteliales) se suelen sembrar sobre superficies tratadas con cultivos de tejidos, a las que se unen para sobrevivir y proliferar. Para la propagación, el recuento y el análisis posterior, las células adherentes y las células de los tejidos sólidos deben disociarse para crear suspensiones. Se requieren suspensiones de células sueltas para el recuento celular, la resiembra para subcultivo y los ensayos/análisis celulares.
Entre los reactivos de disociación se cuentan las enzimas naturales, alternativas no enzimáticas más suaves o quelantes de calcio para evitar que las cadherinas se adhieran, liberando las células de las superficies y unas de otras. Los reactivos de disociación celular pueden ser específicos para sustratos de la matriz extracelular (ECM).
Nuestra completa colección de reactivos de disociación celular consta de:
- Tripsina: recombinante de origen animal y tripsina StableCell™ para desprendimiento celular general
- Disoluciones de tripsina-EDTA y EDTA
- Colagenasa, elastasa, dispasa específicas de la ECM
- Disoluciones no enzimáticas Accutase™ y Accutase®
Tripsina, tripsina recombinante, tripsina StableCell™
La tripsina es una proteasa de serina y una de las enzimas de separación más comunes utilizada con líneas celulares adherentes y para disociación de los tejidos. Normalmente se ha observado que los preparados de tripsina no elaborada son más eficientes para ambas aplicaciones, pero la incubación de las células con una concentración elevada de tripsina o durante demasiado tiempo corre el riesgo de dañar las membranas celulares y matar las células. Lo más frecuente es que las células cultivadas se eliminen del sustrato de cultivo mediante el tratamiento con tripsina en combinación con EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), en la que la concentración de tripsina puede oscilar entre el 0,025 % y el 0,5 %.
Las disoluciones de tripsina StableCell™ se desarrollaron para conseguir el desprendimiento celular como lo consiguen las disoluciones convencionales de tripsina, sin necesidad de repartir en alícuotas, congelar y descongelar la tripsina. Esto ahorra un tiempo significativo al eliminar la necesidad de repartir en alícuotas y esperar a que la tripsina se descongele para los pases celulares o los experimentos, y libera un espacio precioso en los congeladores del laboratorio. Se recomienda que nuestras disoluciones de tripsina StableCell™ se conserven a 2-8 °C, pero nuestros estudios indican que la tripsina StableCell™ retiene >90 % de actividad y rendimiento incluso conservada a 37 °C.
Colagenasa y dispasa
La colagenasa rompe los enlaces peptídicos en el colágeno trihelicoidal nativo. Debido a su capacidad única de hidrolizar el colágeno nativo, se utiliza mucho en el aislamiento de células de tejido animal. Hay colagenasas en una variedad de microorganismos y en muchas células animales diferentes. La más potente es la colagenasa “cruda” secretada por la bacteria anaerobia Clostridium histolyticum.
Las dispasas son proteasas rápidas, eficaces, suaves y neutras que pueden separar del sustrato las láminas epiteliales intactas del cultivo. La dispasa I se ha utilizado para digerir el tejido pulmonar y procesar las células para tinción del flujo, así como para el aislamiento de las células TCD4 murinas.
Reactivos de disociación para cultivos especializados
Para disociar o desprender tipos de células y tejidos que pueden requerir una actividad enzimática más suave, las disoluciones Accutase® y Accutase™ utilizan enzimas eficientes a una menor concentración. Estas disoluciones:
- Separan eficazmente las células madre embrionarias y las neuronales
- Desprenden suavemente las células para preservar la viabilidad celular y pueden mejorar el rendimiento celular
- No requieren neutralización
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