GenElute™-E 단일 스핀 DNA 및 RNA 정제 키트 FAQ

다음은 GenElute™-E 단일 스핀 DNA 및 RNA 정제 키트와 관련하여 자주 하는 질문의 목록입니다.

기술 FAQ

애플리케이션 FAQ

프로토콜 FAQ

GenElute-E 단일 스핀 DNA 및 RNA 정제 키트는 네거티브 크로마토그래피를 사용하여 핵산을 분리합니다. 이 접근법은 어떤 방법으로 워크플로를 간소화합니까?

기존의 실리카 기반 스핀 정제 추출에서 결합, 세척, 방출 단계를 최적화하는 대신, 본 기술은 생체분자의 크기에 기반한 단일 단계 분획을 통한 분리에 중점을 두어 불순물을 제거합니다.

SmartLyse 효소의 어떤 점이 그렇게 특별합니까?

표적 SmartLyse™ 효소는 용해 시간을 단축하고 더 효율적인 워크플로를 가능하게 하며, 결합 및 세척 단계를 없앰으로써 연구자들을 번거로운 튜브 조작에서 해방시킵니다.

흔히 정제를 위해 실리카 컬럼을 사용할 때, 연구자들은 더 농축된 시료를 만들기 위해 더 작은 부피로 용리하거나 더 높은 수율을 위해 두 번 용리할 수 있습니다. 이 기술은 어떻게 다릅니까?

실리카를 사용하여 더 작은 부피로 용리할 때, 더 높은 농도를 얻을 수 있습니다. 하지만 시료를 결합 및 세척하기 위해 필요한 잔류 염과 에탄올 또한 더 높은 농도로 존재할 것입니다. 네거티브 크로마토그래피를 사용하면, 로딩 부피는 기본적으로 회수 부피(일반적으로 약 80~100µL)이며, 회수된 시료는 실리카로 분리된 핵산 시료보다 대개 농도가 높습니다. 실리카를 사용하면, 두 번째 용리는 일반적으로 더 많은 공정 오염물질과 더 작은 절편화된 핵산을 방출하며, 이는 부정확한 계량으로 이어지고 수율을 과대 평가하는 결과를 가져옵니다.

GenElute-E 기술은 핵산 계량의 정확성을 어떻게 향상시킵니까?

정제를 위해 네거티브 크로마토그래피를 사용할 때 오염물질이 유입되는 공정이 없으며, 원심분리 단계를 줄임으로써 더 많은 전장 핵산이 회수됩니다. 이로 인해 다운스트림 애플리케이션으로 이어지는 계량의 정확성이 향상되고 다운스트림 애플리케이션 자체를 방해할 수 있는 오염물질을 배제하여 더 견고한 실험으로 만듭니다.

GenElute-E가 연구자들에게 제공하는 다른 장점으로는 어떤 것이 있습니까?

결합 및 세척 단계의 제거는 더 지속 가능한 핵산 분리 방법이며, 플라스틱 튜브 및 통과액 폐기물의 양을 감소시킵니다. 이런 이유로 GenElute™-E는 모두에게 더욱 이로운 지속 가능한 친환경 화학 제품입니다.

까다로운 증폭 효소(중합효소)를 사용하고 있습니다. 이 기술을 이용하면 추출할 때 Mg+2 이온을 배제할 수 있습니까?

물론 가능합니다! GenElute™-E 단일 스핀 정제 기술은 이온을 고갈시켜 "뜻밖의" 억제제 없이 효소 버퍼 성분의 농도가 더 잘 최적화되도록 보장함으로써 더 강력한 다운스트림 효소 반응을 가능하게 합니다.

레진을 통과한 후에 용해 완충액(lysis buffer)과 클리어링 완충액(clearing buffer)의 조성은 어떤가요?

EDTA, SDS 또는 과량의 염이 존재하면 PCR/염기서열 분석 반응에 영향을 미칩니다.

용해 완충액 정보는 알려드릴 수 없지만, 카오트로픽(chaotropic) 염이 없다고 말씀드릴 수 있습니다. 레진은 탈염 레진이므로 EDTA, SDS, 염이 제거됩니다. 이것이 바로 이 기술의 대단한 점이죠!

해당 기술이 시료에 어떤 편향성을 가져옵니까?

GenElute™-E는 일부 "결합-세척-용리" 기술이 도입할 수 있는 편향성을 가져오지 않습니다. 본 기술은 무언가를 결합하거나 방출하기 보다는 크기에 따라 분리하기 때문입니다.

정제된 DNA는 여러 번의 동결-해동 주기 동안 얼마나 안정합니까?

시료의 다양성 때문에 유동성이 있습니다(시료 수집 방식, 농도, 절편 길이, 염기서열[GC 함량], 분리 전 보관 등). 하지만 시료는 키트에 포함되어 있는 표준 저장 버퍼(1배 TE)로 교환됩니다.

첫 번째, 스핀 컬럼 상에서 다중 스핀과 관련된 전단 및 전단 손상 감소와 관련하여, 이것이 RNA와도 관련이 있습니까? 두 번째, 핵산(특히 RNA)을 추출하려고 할 때, 네거티브 크로마토그래피 컬럼이 거대 음전하 단백질/당단백을 어떻게 배제합니까?

• RNA 추출은 일반적으로 시료 내 효소 소화로 인해 절편으로 분해되기 쉽습니다(RNases). 그러므로, 핵산을 이러한 효소들로부터 가능한 한 빨리 분리하는 것이 중요합니다. 일반적인 결합-세척-용리 스핀 추출 과정에서, 멤브레인이나 비드/레진으로부터 생체분자가 결합 및 방출되는 공정뿐만 아니라 여러 번의 원심분리 단계로 인해 시료 전단이 발생합니다. RNA 분리 워크플로에서 이러한 공정 변수를 제거하면 최종 시료 절편 품질을 훨씬 더 잘 관리할 수 있습니다. 하지만, 일부 다운스트림 애플리케이션은 이러한 분해에 덜 민감하기 때문에 이 정도 수준의 관리가 필요하지 않습니다. 관리는 특히 수율이 더 낮은 시료에 도움이 되며, 다운스트림 공정 실패 시 문제 해결에 도움을 줄 수 있습니다.
• 분리를 위해 생체분자의 차이를 이용하는 크로마토그래피 방법이 많이 있으며, 실리카를 위한 이온/전하가 그 예입니다. "네거티브 크로마토그래피"는 크기 배제에 의해 작동하며, 더 큰 분자량 생성물을 먼저 수집합니다. 이제 "네거티브"라는 단어 사용과 전하 간의 관련성을 이해할 수 있습니다! SmartLyse™ 효소에 의해 소화되는 단백질은 RNA 분자보다 더 느리게 레진 매트릭스를 통과하여 흐르며, 원심분리 후 컬럼 내에 체류합니다. 빠른 팁: 만약 이 소화된 단백질 절편을 분자량이 더 작은 다른 생체분자처럼 수집하기를 원한다면, 정제 후 더 빠른 속도에서 컬럼을 원심분리하여 더 느리게 움직이는 분획을 수집할 수 있습니다.