X-tremeGENE™ 트랜스펙션 시약 비교 가이드

X-tremeGENE^TM HP, X-tremeGENE^TM 9, 및 X-tremeGENE^TM 360 트랜스펙션 시약

세포를 성공적으로 전달감염(트랜스펙션)시키는 능력은 세포 유형, 프로토콜 및 트랜스펙션 시약의 성분에 따라 크게 다릅니다. X-tremeGENE™ 트랜스펙션 시약은 DNA, 소형 RNA 및 CRISPR/Cas9 요소를 포함한 다양한 분자를 사용하여 일반 세포와 전달감염이 까다로운 세포를 효율적으로 트랜스펙션하도록 설계되었습니다.

신제품: X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약은 siRNA/miRNA, 플라스미드 DNA 및 CRISPR/Cas9 물질을 전달감염이 까다로운 세포 및 일반 세포 유형으로 전달하기 위한 고성능의 다목적 기능을 가진 신뢰할 수 있는 솔루션입니다. 자세한 정보는 sigmaaldrich.com/xtg360ro에 방문하십시오.

• 효율 및 최적화
• 주요 응용분야 테이블
• 세포 유형별 제품 권장 사항

NR: 권장하지 않음

	X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 9 DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약
DNA 트랜스펙션	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
siRNA/miRNA 트랜스펙션 및 CRISPR/Cas9 성분	NR	NR	✓ ✓ ✓
표준 세포주를 사용한 효율(예: COS-7, HEK-293, HeLa, NIH 3T3 및 CHO-K1)	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
"전달감염이 까다로운" 세포를 사용한 효율(예: HT 29, HCT 116 및 K-562 세포)	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
일차 세포의 트랜스펙션	✓ ✓	NR	✓ ✓ ✓
시약의 완만함	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
편리한 사용(최적화 최소화)	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
트랜스펙션 이후 세포 독성	매우 낮음	낮음	매우 낮음

주요 응용분야	X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 9 DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ siRNA 트랜스펙션 시약
세포 과정의 기능적 연구	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
정량 단백질 발현	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓	—
siRNA를 사용한 유전자 녹다운 연구	—	—	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓

그림 1. X-tremeGENE™ HP 시약은 인간의 1차 섬유아세포를 효율적으로 전달합니다.

1차 섬유아세포는 인간의 포피에서 분리되어 6-웰 세포 배양 플레이트에서 4 μL의 X-tremeGENE^™ HP 시약 및 1 μg의 GFP-인코딩 플라스미드 DNA로 전달감염되었습니다. GFP 발현은 트랜스펙션 48시간 후에 시각화되었습니다. 왼쪽 패널은 GFP 형광 분석을, 그리고 오른쪽 패널은 해당하는 명시 야상(brightfield image)을 보여줍니다.

그림 2. X-tremeGENE™ HP 및 X-tremeGENE™ 9 시약은 인간 간엽성 줄기세포에서 competitor 시약보다 성능이 우수합니다.

인간 간엽성 줄기세포는 서로 다른 기증자 4명의 골수 흡입으로부터 분리되었습니다. 세포는 X-tremeGENE^™ HP 시약(XHP), X-tremeGENE^™ 9 시약(X9) 및 competitor 시약(LTX)을 표시된 비율로 사용하여 트랜스펙션되었습니다(μL 시약 : μg GFP-인코딩 플라스미드 DNA. 비율 2:1은 X-tremeGENE^TM 9 시약을 사용하여 테스트되지 않음). 트랜스펙션하지 않는 세포는 대조군(음성) 역할을 합니다. FACS 분석은 트랜스펙션 48시간 후에 수행되었습니다.

그림 3. X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약은 전달감염이 까다로운 세포 유형에서 competitor 시약보다 성능이 우수합니다.

그림 4. X-tremeGENETM 360은 A549 세포에서 테스트된 Lipofectamine 시약보다 성능이 우수합니다. A549 세포는 X-tremeGENETM 360, Lipofectamine^® 2000(Thermo Fisher Scientific) 또는 Lipofectamine^® 3000(Thermo Fisher Scientific) 중 하나를 표시된 시약과 DNA 간 비율로 24동안 사용하여 플라스미드 DNA를 인코딩하는 루시페라아제로 트랜스펙션되었습니다. 트랜스펙션은 전통적인 분석법을 사용하여 루시페라아제 활성으로 측정되었습니다. 세포독성은 단일 세포 대비 손상된 세포의 세포액에서 LDH 배출을 정량화함으로써 평가되었습니다. X-tremeGENETM 360을 사용하여 최적 비율로 트랜스펙션한 세포에서는 Lipofectamine^® 2000 또는 Lipofectamine^® 3000으로 트랜스펙션한 세포에 비해 향상된 이식 유전자 발현 및 낮은 세포 독성이 관찰되었습니다.

세포는 X-tremeGENE^™ HP 시약(XHP) 및 competitor 시약(LTX 및 L2K)을 표시된 비율로 사용하여 트랜스펙션되었습니다(μL 시약 : μg GFP-인코딩 플라스미드 DNA). 트랜스펙션 효율은 GFP 형광 현미경을 사용하여 시각화되었습니다.

세포 유형별 제품 권장 사항

NR: 권장하지 않음

확립된 세포주	X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 9 DNA 트랜스펙션 시약	X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약
CHO-K1	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
COS-7	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
NIH-3T3	✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
HeLa	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
HEK-293	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
Hep-G2	✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
HT1080	✓ ✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓
HT29	✓	NR	✓ ✓
PC-3	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
K-562	✓ ✓ ✓	NR	✓ ✓ ✓
U-2 OS	✓	NR	✓
MCF-7	✓	✓ ✓ ✓	✓ ✓ ✓
RAW	✓	NR	✓ ✓
HCT 116	✓ ✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓ ✓
Jurkat	✓	NR	✓
PC-12	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓
일차 세포
인간 1차 섬유아세포	✓ ✓	NR	✓ ✓
MEF	✓ ✓	NR	✓ ✓
줄기세포
인간 간엽성 줄기세포	✓ ✓	NR	✓ ✓
쥐 배아 줄기세포(E14TG2a)	✓ ✓	✓ ✓	✓ ✓
곤충 세포주
High Five	✓ ✓	NR	✓ ✓
SF9	✓ ✓	NR	✓ ✓

참고: 위의 데이터는 시토메갈로 바이러스(CMV) 촉진 물질과 함께 GFP-인코딩 pcDNA3.1 플라스미드 또는 루시페라아제-인코딩 pCI 플라스미드 중 하나를 사용하여 생성되었습니다. 이러한 권장 사항은 실험 결과에 기초한 지침입니다. 최적의 시약에서는 DNA 비율이 경험적으로 결정되어야 합니다.

 

적용표

X-tremeGENE™은 Roche의 상표입니다. 생명 공학 연구 목적으로만 사용하십시오. 진단 절차에 사용하지 마십시오.

주요 응용분야	추천 제품	혜택
암 연구 유전자 조절 및 단백질 상호 작용 연구와 경로 분석을 포함하는 기능적 세포 분석을 위한 일반적인 암 연구 세포주에 대한 트랜스펙션에 이용합니다. 표적 평가 표적 평가를 위한 일반 세포주의 트랜스펙션에 이용합니다.	X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약 X-tremeGENE™ 9 DNA 트랜스펙션 시약 X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약	낮은 세포 독성 시약으로 인한 표적 이탈 효과 최소화 간단한 방법 전체 세포 유형에 대한 광범위한 적용 가능 낮은 세포 밀도로 뛰어난 트랜스펙션 효율 제공 최대 100 % 혈청에서 활성화
전달감염이 까다로운 세포 및 일차 세포 일차 세포와 "전달 감염이 까다로운" 세포주의 트랜스펙션으로 기능적인 세포 분석을 제공합니다. 단백질 발현 트랜스펙션으로 분석적 또는 정량적 단백질 발현이 가능합니다.	X-tremeGENE™ HP DNA 트랜스펙션 시약 X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약	높은 수준으로 단백질 발현 간단한 방법 신속한 프로토콜 높은 트랜스펙션 효율 혈청을 포함하는 배지의 활성화 인간 또는 동물 유래 성분이 없는 합성
siRNA 트랜스펙션을 사용한 유전자 녹다운	X-tremeGENE™ siRNA 트랜스펙션 시약 X-tremeGENE™ 360 트랜스펙션 시약	낮은 세포 독성 높은 녹다운 효율 전체 세포주에 대한 광범위한 적용 가능 혈청을 포함하는 배지의 활성화

효율 및 최적화 

시약 선택, DNA/RNA, 트랜스펙션 시약 비율 및 프로토콜/기법 등과 같은 최적화가 어떻게 트랜스펙션 효율을 결정하는 주요 요소가 되는지 알아보십시오.